T細胞依存性遅発型喘息反応メディエータの解明

• 研究課題/領域番号: 21K08486
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 審査区分: 小区分54020:膠原病およびアレルギー内科学関連
• 研究機関: 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター)
• 研究代表者: 森 晶夫 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 先端技術開発研究部, 部長 (80251247)
• 研究分担者: 神山 智 独立行政法人国立病院機構(相模原病院臨床研究センター), 先端技術開発研究部, 研究員 (20626783) ; 神沼 修 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 教授 (80342921) ; 大友 隆之 東京薬科大学, 薬学部, 講師 (90463108)
• 研究期間 (年度): 2021-04-01 – 2024-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2023年度)
• 配分額: 4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円); 2023年度: 520千円 (直接経費: 400千円、間接経費: 120千円); 2022年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2021年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
• キーワード: 気管支喘息 / T 細胞 / 遅発型喘息反応 / メディエータ / T細胞

研究開始時の研究の概要

非アトピー型喘息症例の末梢血リンパ球から抗原特異的T細胞クローンを多数樹立し、ヒト培養気管支平滑筋を封入したコラーゲンゲルの収縮アッセイ系により、培養上清中の平滑筋収縮活性を検出する。ヒトおよびマウスのT細胞クローン培養上清中の収縮活性を、まずゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー等の生化学的手法により、精製、同定をめざす。T細胞由来のmRNA、培養上清タンパク質を用いてトランスクリプトーム、プロテオーム解析し、候補分子を絞り込む。さらに、マウスT細胞移入喘息モデルを活用して、in vitro、in vivoの両面から、分子レベルでの同定を進める。

研究成果の概要

ダニ抗原に応答して遅発型喘息反応が認められる症例の末梢血単核球から、ダニ特異的T細胞クローンを樹立した。卵白アルブミン（OVA）特異的T細胞受容体トランスジェニックマウスより、T細胞クローンを複数樹立した。培養ヒトあるいはマウス気管支平滑筋細胞を、コラーゲンゲルに封入し、6日間培養後に収縮活性をアッセイした。活性化に伴い気管支平滑筋収縮活性を産生するT細胞クローンを複数見出したので、上清をゲル濾過、イオン交換により生化学的精製、分画した。クローン間で、遺伝子発現、プロテオーム解析を実施し、候補分子を探索した。十数個の候補分子を絞り込み、リコンビナント体作成、中和抗体による阻害実験を実施した。

研究成果の学術的意義や社会的意義

気管支喘息は、IgE抗体を特徴とするアトピー型とIgE抗体の認められない非アトピー型とに分類される。アトピー型のメカニズムは石坂公成先生が発見したIgE抗体による即時型アレルギー反応により説明されたものの、非アトピー型のメカニズムは未解明のままである。われわれの研究によって、T細胞依存性、IgE抗体非依存性の気管支平滑筋収縮（喘息）反応が個体レベル、細胞レベルで証明された。分子レベルで気管支平滑筋収縮メディエータを同定することによって、成人喘息、難治性喘息の半数を占める非アトピー型喘息のメカニズムが解明されるとともに、新規治療法の開発が進むことが期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Development of a new HISCL automated CXCL9 immunoassay. (2023)
  • 著者名/発表者名: Hasegawa T, Yoshida M, Watanabe S, Kondo T, Asada H, Nakagawa A, Tomii K, Kameda M, Otsuka M, Kuronuma K, Chiba H, Katayanagi S, Miyazaki Y, Mori A.
  • 雑誌名: Sci Rep. 巻: 13 号: 1 ページ: 5342-5342
  • DOI: 10.1038/s41598-023-32513-8
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Re-evaluation of over-the-counter histamine H1-receptor antagonists based on their effects on murine models of allergen-induced nasal hyperresponsiveness (2022)
  • 著者名/発表者名: Uda, N., Ogata, S., Yamasaki, N., Miura, S., Hosomi, N., Mori, A., Goto, M., Miura, K., and Kaminuma, O.
  • 雑誌名: J. Pharm. Sciences. 巻: 150 号: 4 ページ: 275-278
  • DOI: 10.1016/j.jphs.2022.10.004
  • 査読あり
• [雑誌論文] Th17-dependent nasal hyperresponsiveness is mitigated by steroid treatment (2022)
  • 著者名/発表者名: Ueda, S., Miura, K., Kawasaki, H., Ogata, S., Yamasaki, N., Miura, S., Mori, A., and Kaminuma, O.
  • 雑誌名: Biomolecules 巻: 12 号: 5 ページ: 674-674
  • DOI: 10.3390/biom12050674
  • 査読あり
• [雑誌論文] 重症喘息のステロイド抵抗性とその制御 (2022)
  • 著者名/発表者名: 森 晶夫、神山 智、大友 暁美、山口 美也子、組谷 智恵美、岩本 圭右、矢野 光一、藤田 教寛、岩田 真紀、永山 貴紗子、劉 楷、中村 祐人、濱田 祐斗、渡井 健太郎、上出 庸介、福冨 友馬、関谷 潔史、松本 幸一郎、谷本 安、小林 信之、大友 隆之、神沼 修
  • 雑誌名: 日本薬理学雑誌 巻: 157 ページ: 293-298
• [雑誌論文] Suppressive effect of dexamethasone on murine Th9 cell-mediated nasal eosinophilic inflammation (2021)
  • 著者名/発表者名: Koyama Teidai、Miura Kento、Yamasaki Norimasa、Ogata Sawako、Ito Daiki、Saeki Mayumi、Hiroi Takachika、Mori Akio、Kaminuma Osamu
  • 雑誌名: Asia Pacific Allergy 巻: 11 号: 3 ページ: e25-e25
  • DOI: 10.5415/apallergy.2021.11.e25
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] L-type amino acid transporter 1 inhibitor suppresses murine Th2 cell-mediated bronchial hyperresponsiveness independently of eosinophil accumulation (2021)
  • 著者名/発表者名: Ito Daiki、Miura Kento、Saeki Mayumi、Yamasaki Norimasa、Ogata Sawako、Koyama Teidai、Hiroi Takachika、Mori Akio、Endou Hitoshi、Hayashi Keitaro、Kaminuma Osamu
  • 雑誌名: Asia Pacific Allergy 巻: 11 号: 3 ページ: e33-e33
  • DOI: 10.5415/apallergy.2021.11.e33
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] Biochemical analysis of T cell dependent bronchoconstriction (2023)
  • 著者名/発表者名: Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Tawasaki, Y., Iwata, M., Nakamura, Y., Hamada, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O., and Mori, A.
  • 学会等名: American Academy of Allergy Asthma & Immunology Annual Meeting 2023
  • 国際学会
• [学会発表] Biological and biochemical analysis of T cell derived bronchoconstriction (2023)
  • 著者名/発表者名: Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Iwata, M., Nakamura, Y., Hamada, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
  • 学会等名: European Respiratory Society 2023 International Congress
  • 国際学会
• [学会発表] Cellular and molecular analysis of T cell-dependent steroid-resistant asthma model (2023)
  • 著者名/発表者名: Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Nakamura, Y., Hamada, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
  • 学会等名: Asia Pacific Society of Respirology 2023 International Congress
  • 国際学会
• [学会発表] Cellular Analysis of T cell-dependent steroid-resistant asthma (2023)
  • 著者名/発表者名: Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Nakamura, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
  • 学会等名: Asia Pacific Association of Allergy, Asthma and Clinical Immunology International Conference 2023
  • 国際学会
• [学会発表] Pharmacological characterization of T cell-induced bronchoconstriction (2023)
  • 著者名/発表者名: Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasai, Y., Iwata, M., Nakamura, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
  • 学会等名: World Allergy Congress 2023
  • 国際学会
• [学会発表] Biochemical characterization of T cell derived bronvhoconstriction (2023)
  • 著者名/発表者名: Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Kawasai, Y., Iwata, M., Nakamura, Y., Hamada, Y., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O. and Mori, A.
  • 学会等名: European Academy of Allergy and Clinical Immunology 2023
  • 国際学会
• [学会発表] アレルゲン特異的IgE測定用3次元マイクロアレイの開発続報（第4報）：アレルゲンコンポーネント検査 (2023)
  • 著者名/発表者名: 白鳥宏太、中川 舞、川上和美、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第72回日本アレルギー学会学術大会
• [学会発表] アレルゲン特異的IgE測定用3次元マイクロアレイの開発続報（第３報）：牛乳アレルゲンコンポーネント検査 (2023)
  • 著者名/発表者名: 白鳥宏太、中川 舞、川上和美、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第60回日本小児アレルギー学会学術大会
• [学会発表] アレルゲン特異的IgE測定用3次元マイクロアレイの開発続報（第４報）：ピーナッツ・ナッツ類アレルゲンコンポーネント検査 (2023)
  • 著者名/発表者名: 中川 舞、白鳥宏太、川上和美、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第60回日本小児アレルギー学会学術大会
• [学会発表] T cell-dependent steroid-resistant asthma is mediated by tyrosine kinases of costimulatory signal (2022)
  • 著者名/発表者名: Mori, A., Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Iwamoto, K., Yano, K., Fujita, N., Iwata, M., Nagayama, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O.
  • 学会等名: European Academy of Allergy and Clinical Immunology Hybrid Congress 2022
  • 国際学会
• [学会発表] Control of T cell-dependent steroid-resistant asthma model by several kinase inhibitors (2022)
  • 著者名/発表者名: Mori, A., Kouyama, S., Yamaguchi, M., Ohtomo-Abe, A., Iwamoto, K., Yano, K., Fujita, N., Iwata, M., Nagayama K., Ryu, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., Kaminuma, O.
  • 学会等名: European Respiratory Society International Congress 2022
  • 国際学会
• [学会発表] 重症喘息のステロイド抵抗性とその制御 (2022)
  • 著者名/発表者名: 森 晶夫、神山 智、大友暁美、山口美也子、組谷千恵美、岩本圭右、矢野光一、藤田教寛、岩田真紀、永山貴紗子、劉 楷、中村祐人、濱田祐斗、渡井健太郎、上出庸介、福冨友馬、関谷潔史、松元幸一郎、谷口 安、小林信之、大友隆之、神沼 修
  • 学会等名: 第95回日本薬理学会年会 シンポジウム27 難治性ぜんそく治療への新たな挑戦
• [学会発表] アレルゲン特異的IgE測定用3次元マイクロアレイの開発続報（第3報―1）：微量検体を用いた動じた項目測定 (2022)
  • 著者名/発表者名: 白鳥宏太、中川 舞、川上和美、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第71回日本アレルギー学会学術大会
• [学会発表] 微量検体から多項目のアレルゲン特異的IgEを測定する3次元マイクロアレイの開発続報（第2報）：干渉試験の評価と指頭血採血による測定 (2022)
  • 著者名/発表者名: 中川 舞、白鳥宏太、川上和美、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第59回日本小児アレルギー学会
• [学会発表] アレルゲン特異的IgE測定用3次元マイクロアレイの開発続報（第3報―2）：ダニアレルゲンコンポーネント測定 (2022)
  • 著者名/発表者名: 中川 舞、白鳥宏太、川上和美、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第71回日本アレルギー学会学術大会
• [学会発表] Pharmacological characterization of T cell-induced bronchoconstriction in vivo and in vitro (2021)
  • 著者名/発表者名: Mori, A., Kouyama, S., Yamaguchi, Y., Kumitani, C., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Iwamoto, K., Yano, K., Iwata, M., Nagayama, K., Ryu, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Y., Ohtomo, T., and Kaminuma, O.
  • 学会等名: European Academy of Allergy and Clinical Immunology Hybrid Congress 2021 (Madrid-Krakow, on line)
  • 国際学会
• [学会発表] Sublingual immunotherapy suppresses mast cell degranulation through the upregulation of thrombospondin-1 (2021)
  • 著者名/発表者名: Kaminuma, O., Kitamura, N., Gotoh, M., Okubo, K., Mori, A., and Hiroi, T.
  • 学会等名: European Academy of Allergy and Clinical Immunology Hybrid Congress 2021 (Madrid-Krakow, on line)
  • 国際学会
• [学会発表] Molecular characterization of bronchoconstriction induced by activated T cells (2021)
  • 著者名/発表者名: Kouyama, S., Yamaguchi, M., Kumitani, C., Ohtomo-Abe, A., Kawasaki, Y., Iwamoto, K., Yano, K., Iwata, M., Nagayama, K., Ryu, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Fukutomi, Ohtomo, T., Kaminuma, O, and Mori, A.
  • 学会等名: European Respiratory Society 2021 International Congress (London, on line)
  • 国際学会
• [学会発表] Possible mechanisms of T cell-induced bronchoconstriction (2021)
  • 著者名/発表者名: Mori, A., Kouyama, S., Ohtomo-Abe, A., Ryu, K., Nakamura, Y., Hamada, Y., Watai, K., Kamide, Y., Sekiya, K., Ohtomo, T., Kaminuma, O.
  • 学会等名: Asia Pacific Association of Allergy, Asthma and Clinical Immunology International Conference 2021 (Taipei, on line)
  • 国際学会
• [学会発表] T細胞依存的に発症する新しいアレルギー性皮膚炎モデル (2021)
  • 著者名/発表者名: 尾形佐和子、三浦健人、吉川日出夫、森 晶夫、廣井隆親、神沼 修
  • 学会等名: 第70回日本アレルギー学会学術大会（横浜）
• [学会発表] アレルゲン特異的IgE測定用3次元マイクロアレイの開発1（第2報）：食物アレルゲン特異的IgE抗体測定性能評価 (2021)
  • 著者名/発表者名: 若山 翔、中川 舞、川上和美、古志洋一郎、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第70回日本アレルギー学会学術大会（横浜）
• [学会発表] アレルゲン特異的IgE測定用3次元マイクロアレイの開発2（第2報）：吸入アレルゲン特異的IgE抗体測定性能評価 (2021)
  • 著者名/発表者名: 川上和美、中川 舞、若山 翔、古志洋一郎、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第70回日本アレルギー学会学術大会（横浜）
• [学会発表] Th9細胞依存的なアレルギー性炎症は標的臓器間で異なるステロイド応答性を示す (2021)
  • 著者名/発表者名: 三浦健人、佐伯真弓、古山禎大、山崎憲政、尾形佐和子、廣井隆親、森 晶夫、神沼 修
  • 学会等名: 第70回日本アレルギー学会学術大会（横浜）
• [学会発表] Th17細胞依存的ステロイド抵抗性喘息モデルに対するアミノ酸トランスポーターLAT1阻害薬の効果 (2021)
  • 著者名/発表者名: 林啓太朗、佐伯真弓、三浦健人、山崎憲政、尾形佐和子、森 晶夫、廣井隆親、遠藤 仁、神沼 修
  • 学会等名: アレルギー・好酸球研究会2021
• [学会発表] Th17細胞依存的マウス鼻粘膜炎症モデルに対するdexamethasoneの効果 (2021)
  • 著者名/発表者名: 三浦健人、上田周作、山崎憲政、尾形佐和子、川崎英利、森 晶夫、神沼 修
  • 学会等名: アレルギー・好酸球研究会2021
• [学会発表] 微量検体から多項目のアレルゲン特異的IgEを測定する3次元マイクロアレイの評価1 (2021)
  • 著者名/発表者名: 古志洋一郎、中川 舞、川上和美、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第58回日本小児アレルギー学会（横浜/Web開催）
• [学会発表] 微量検体から多項目のアレルゲン特異的IgEを測定する3次元マイクロアレイの評価2 (2021)
  • 著者名/発表者名: 川上和美、中川 舞、古志洋一郎、伊藤正照、森 晶夫
  • 学会等名: 第58回日本小児アレルギー学会（横浜/Web開催）