研究課題/領域番号 |
21K08591
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分55010:外科学一般および小児外科学関連
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研究機関 | 東北大学 |
研究代表者 |
稲垣 明子 東北大学, 医学系研究科, 助教 (20360224)
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研究分担者 |
後藤 昌史 東北大学, 医学系研究科, 教授 (50400453)
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研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2022年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2021年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
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キーワード | 膵島移植 / 細胞移植 / 皮下移植 / 血管新生 / 1型糖尿病 / スキャホールド / 移植部位 / 細胞生着促進 |
研究開始時の研究の概要 |
現在の膵島移植は門脈移植が標準法であるが低侵襲でアプローチし易い皮下移植の実現が切望されている。皮下膵島移植の成績は著しく不良であるため、臨床応用可能な皮下膵島生着促進プロトコールの構築が急務である。本研究では不織布構造のゼラチン基材であるGHNF(gelatin hydrogel nonwoven fabric)を用いて、皮下における安全で効果的な膵島生着促進プロトコールの樹立を目指す。さらに膵島生着部位に発現する遺伝子やタンパク質の発現を解析し、皮下における膵島生着メカニズムの学理を究明する。
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研究実績の概要 |
現行の膵島移植の標準移植法は門脈移植であるが、今後の再生医療との融合を視野に入れると、低侵襲でアクセスが容易な皮下移植の実現が切望されている。しかし、皮下は膵島の生着効率が悪いため、細胞外マトリックスや新生血管誘導による移植環境の最適化が必須である。そこで本研究では、不織布構造ゼラチン基材(gelatin Hydrogel nonwoven fabric; GHNF)を移植予定箇所の皮下に前留置する、皮下膵島移植プロトコールの確立を目的とする。2021年度はマウスモデルにおいて適留置期間が6週であることを明らかにした。そこで、2022年度は、皮下における膵島生着環境の最適化に関わる因子の解析を行った。C57BL/6マウス皮下に、2枚のGHNFの間にスペーサーとしてシリコンを挟んで留置し、留置期間を2週間(2W群)、4週間(4W群)、6週間(6W群)、8週間(8W群)の4群を設定して、皮下組織の免疫組織化学染色、炎症性・抗炎症性サイトカインの測定、リアルタイムPCRによる細胞外マトリックスやサイトカイン等の遺伝子発現解析を行った。 免疫組織化学染色の結果、膵島移植前のGHNF周囲被膜および膵島移植後の膵島周囲間質でのvon Willebrand factor(vWF)陽性血管数は6W群で有意に増加した(p<0.01)。膵島周囲線維被膜部のECM(ラミニン、コラーゲンⅢ、コラーゲンⅣ)割合は、留置期間に応じて増加傾向があり、8W群が有意に高値であった(p<0.01)。GHNF内および周囲の被膜内のCD206陽性細胞は2W群が最も多く、経時的に減少した(p<0.01)。IL-1b、IL-γ等の炎症性サイトカインは2W群で最も高く、経時的に減少し、8W群で再上昇した。リアルタイムPCRでは2W群に比べて6W群で22遺伝子の増幅がみられた。 また、ラット皮下移植モデルにおいて、GHNFの至適前留置期間が3週間であることを、確認した。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
2022年度は当初の計画通りマウスモデルにおける皮下膵島生着環境の最適化に関わる因子の解析を行い、膵島生着に関与していると考えられる新生血管因子、細胞外マトリックスやサイトカインを同定することできた。また、ラットモデルにおいて、GHNFの至適留置期間を確認することができた。
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今後の研究の推進方策 |
マウスモデルの検証で、GHNF前留置部に新生血管網の評価をCT血管造影で行う計画であったが、解像度等の問題で微小血管の検出には不向きであることが判明した。そこで、血管内皮細胞の糖鎖を特異的に認識するトマトレクチンを静脈投与し、共焦点レーザー走査顕微鏡微で微小血管網を観察する方法に切り替えて評価を行う。また、GHNFに脂肪由来幹細胞(Adipose-derived Stem Cell:ADSC)を付加することで、移植成績の上乗せされるかを検証する。さらに、ラットモデルにおけるGHNF前留置の移植効率に対する効果を、糖尿病ラットモデルへの皮下膵島移植によって明らかにする。
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