| 研究課題/領域番号 |
21K12258
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分63030:化学物質影響関連
|
|---|
| 研究機関 | 金沢医科大学 |
|---|
研究代表者 |
坂田 ひろみ 金沢医科大学, 医学部, 准教授 (50294666)
|
|---|
| 研究分担者 |
八田 稔久 金沢医科大学, 医学部, 教授 (20238025)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
|
| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
|
|---|
| キーワード | 組織透明化 / 免疫染色 / マウス / 多重染色 / ホールマウント染色 / 免疫組織化学 / in situ hybridization / 画像解析 |
|---|
| 研究開始時の研究の概要 |
本研究では、発生毒性試験に利用可能な組織構築の定量解析法の確立を目指す。まず、より大きな標本の透明化を目指し、迅速組織透明化法（RAP）を改良し、ホールマウントおよび厚切りスライス標本における多重染色法を確立する。さらにこの手法で多重染色された標本を用い、特定領域の細胞数計測や特異的マーカー分子を発現する構造等の計測を試み、どのような指標についての解析が毒性試験に利用可能かについて検討する。その後、実際に毒性試験に利用することを想定し、発生毒性が明らかな陽性物質(エタノール、バルプロ酸など)により誘導した既知の形態学的変化が、本研究で考案した方法でも検出できるか否かを検証しする。
|
| 研究成果の概要 |
我々が開発した迅速骨染色法（RAP-B）は、迅速かつ非破壊的な組織清拭システム（RAP）に基づいている。RAPの特筆すべき利点の一つは、組織透明化処理後のホールマウント標本であっても組織学的構造が保存されることである。本研究ではこのRAPの特性に着目し、マウスの胎児のホールマウント標本や成獣マウスの各種臓器の厚切り組織切片を用いた免疫組織化学的解析やin situハイブリダイゼーションへのRAP応用を検討した。また、チラミドシグナル増幅法（TSA）を用いた蛍光多重免疫組織化学染色へのRAPの適用についても検討した。
|
| 研究成果の学術的意義や社会的意義 |
近年、組織透明化技術は、神経組織内部のネットワークの解析や、病理組織標本の解析などに広く使用され、無くてはならない技術となっている。我々の考案したRAPはアルカリ溶液であるにも関わらず、加温や長時間の反応を行っても軟部組織の崩壊が起こらず、標本の形態や骨格の原位置が保たれるという優れた特徴を持つ。他の組織透明化法で使われる試薬より安価、簡便、迅速などの点で優位であることが特徴である。また、研究は免疫染色等を行った後の標本を透徹する高屈折率マウント液は蛍光標識した標本にも使用可能であるうえ、安価な試薬の組み合わせで調整が可能であるうえ、水溶性であり、大変扱いやすい溶液となっており汎用性が高い。
|
