| 研究課題/領域番号 |
21K16285
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分54020:膠原病およびアレルギー内科学関連
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
辻 英輝 京都大学, 医学研究科, 助教 (50894755)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円)
2023年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2022年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | 全身性エリテマトーデス / 抗DNA抗体 / 自己抗体 / B細胞 / HLA / DNA / 自己免疫疾患 / 主要組織適合遺伝子複合体 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
抗DNA抗体はSLEの発症に関わる重要な自己抗体である。特定のHLAクラスII分子はSLEの疾患感受性と関連するため、抗DNA抗体の産生にHLAクラスII分子の関与を考えた。遺伝子導入細胞を用いてHLAクラスII分子とDNAの結合性、およびHLAクラス分子によるDNAの提示能とその病原性を解析する。レポーター遺伝子を導入した細胞を用いて、HLAクラスII分子/DNA複合体によるB細胞受容体の反応を解析する。HLAクラスII分子/DNA複合体をマウスに免疫し、抗DNA抗体の誘導を試みる。本研究により抗DNA抗体産生機序が解明されれば、抗DNA抗体産生制御による新規SLE治療法の創出が期待できる。
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| 研究実績の概要 |
本研究は全身性エリテマトーデス（SLE）に関わるHLAクラスII分子の機能を解析し、抗DNA抗体の産生機序を解明することを目的とする。そのため、①HLAクラスII分子によるDNAの提示能の解析、②HLAクラスII分子によって提示されるDNAによるDNA応答性B細胞受容体（BCR）刺激実験、③マウスを用いたDNA/HLAクラスII分子複合体による抗DNA抗体産生実験を計画した。HLAクラスII分子（HLA-DR15）発現細胞とゲノムDNAと共培養したところ、細胞表面のHLA-DR15とDNAの結合が確認された。B16F10細胞でのIFN-刺激下で細胞表面に発現させた内在性のMHCクラスII（H-2b）分子とDNAの結合も確認された。Biotin化DNAをHLAクラスII発現細胞と共培養したlysateをstreptavidinで沈降しWestern-blotしたところ、DNAとHLA-DR15の結合が確認された。さらに、HLA-DR15のペプチド結合溝に特異的に結合するSP3ペプチドを用いたところ、DNAのHLAクラスII分子への結合が競合阻害され、HLAクラスII分子へのDNAの特異性が検証された。HLAクラスII分子各アリルとDNAの結合能がSLEの疾患感受性と関連するかを検討したところ、両者の間に相関がみとめられた。DNA応答性BCR発現レポーター細胞を作成した。その細胞を用いて実験②のHLAクラスII分子によって提示されるDNAによるDNA応答性BCR刺激実験を行い、B細胞の活性化が確認された。③マウスを用いたDNA/HLAクラスII分子複合体の免疫による抗DNA抗体産生実験を試みたが、腎炎の発症や抗DNA抗体産生は認められなかった。
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