ヒト細胞遺伝子改変法によるBRCA1へテロ欠失細胞の作成と解析

• 研究課題/領域番号: 22500999
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 発がん
• 研究機関: 愛知医科大学
• 研究代表者: 小西 裕之 愛知医科大学, 医学部, 准教授 (20344335)
• 研究分担者: 細川 好孝 愛知医科大学, 医学部, 教授 (60229193) ; シバスンダラン カルナン 愛知医科大学, 医学部, 助教 (30557096)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2012年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2011年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2010年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
• キーワード: BRCA1 / ハプロ不全 / ゲノム不安定性 / ヒト細胞遺伝子改変 / ヒト細胞遺伝子改変法

研究概要

BRCA1へテロ異常が乳癌発生に果たす役割を検討するため、遺伝子ターゲッティングにより非癌ヒト乳腺上皮細胞からBRCA1ヘテロ欠失クローンを作成し、表現型を解析した。その結果、同クローンに癌形質の獲得を示唆する徴候は認めなかったが、DNA相同組換え修復不全、ゲノム傷害性薬剤感受性亢進、ゲノム不安定性を認めた。よって、BRCA1ヘテロ変異は直接形質転換を誘導し癌化を進行させることはないが、ハプロ不全を介して乳癌発生の素地を形成するものと示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] KRAS 変異がんの治療法 --- 複数の分子標的薬剤を併用する --- (2013)
  • 著者名/発表者名: 小西裕之
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 31 ページ: 538-539
  • URL: https://www.yodosha.co.jp/jikkenigaku/nhpd/9784758100939/c3.html
• [雑誌論文] Arsenic trioxide prevents nitric oxide production in LPS-stimulated RAW 264.7 by inhibiting a TRIF-dependent pathway. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M, Ota A, Karnan S, Ekhtear H, Konishi Y, Damdindorj L, Konishi H, Yokochi T, Nitta M, Hosokawa Y.
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: 104 号: 2 ページ: 165-70
  • DOI: 10.1111/cas.12053
  • 査読あり
• [雑誌論文] KRAS変異がんの治療法 -- 複数の分子標的薬剤を併用する -- (2013)
  • 著者名/発表者名: 小西裕之
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 31 ページ: 538-539
• [雑誌論文] Simple monitoring of gene targeting efficiency in human somatic cell lines using the PIGA gene. (2012)
  • 著者名/発表者名: Karnan S, Konishi Y, Ota A, Takahashi M, Damdindorj L, Hosokawa Y, Konishi H.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 7 号: 10 ページ: e47389-e47389
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0047389
  • 査読あり
• [雑誌論文] A system for the measurement of gene targeting efficiency in human cell lines using an antibiotic resistance-GFP fusion gene. (2012)
  • 著者名/発表者名: Konishi Y, Karnan S, Takahashi M, Ota A, Damdindorj L, Hosokawa Y, Konishi H.
  • 雑誌名: BioTechniques 巻: 53 号: 3 ページ: 141-152
  • DOI: 10.2144/0000113911
  • 査読あり
• [雑誌論文] Assessment of the long-term transcriptional activity of a 550-bp-long human ss-actin promoter region. (2012)
  • 著者名/発表者名: Damdindorj L, Karnan S, Ota A, Takahashi M, Konishi Y, Hossain E, Hosokawa Y, Konishi H.
  • 雑誌名: Plasmid 巻: 68 号: 3 ページ: 195-200
  • DOI: 10.1016/j.plasmid.2012.07.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] The growth response to androgen receptor signaling in ERalpha-negative human breast cells is dependent on p21 and mediated by MAPK activation. (2012)
  • 著者名/発表者名: Garay JP, Karakas B, Abukhdeir AM, Cosgrove DP, Gustin JP, Higgins MJ, Konishi H, Konishi Y, Lauring J, Mohseni M, Wang GM, Jelovac D, Weeraratna A, Sherman Baust CA, Morin PJ, Toubaji A, Meeker A, De Marzo AM, Lewis G, Subhawong A, Argani P, Park BH.
  • 雑誌名: Breast Cancer Res 巻: 14 号: 1
  • DOI: 10.1186/bcr3112
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mutation of a single allele of the cancer susceptibility gene BRCA1 leads to genomic instability in human breast epithelial cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Konishi H, Mohseni M, Tamaki A, Garay JP, Croessmann S, Karnan S, Ota A, Wong HY, Konishi Y, Karakas B, Tahir K, Abukhdeir AM, Gustin JP, Cidado J, Wang GM, Cosgrove D, Cochran R, Jelovac D, Higgins MJ, Arena S, Hawkins L, Lauring J, Gross AL, Heaphy CM, Hosokawa Y, Gabrielson E, Meeker AK, Visvanathan K, Argani P, Bachman KE, Park BH.
  • 雑誌名: Proc Natl Acad Sci U S A 巻: 108 号: 43 ページ: 17773-8
  • DOI: 10.1073/pnas.1110969108
  • 査読あり
• [雑誌論文] PIK3CA mutations and EGFR overexpression predict for lithium sensitivity in human breast epithelial cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Higgins MJ, Beaver JA, Wong HY, Gustin JP, Lauring JD, Garay JP, Konishi H, Mohseni M, Wang GM, Cidado J, Jelovac D, Cosgrove DP, Tamaki A, Abukhdeir AM, Park BH.
  • 雑誌名: Cancer Biol Ther 巻: 11 号: 3 ページ: 358-67
  • DOI: 10.4161/cbt.11.3.14227
  • 査読あり
• [雑誌論文] PIK3CA mutations and EGFR overexpression predict for lithium sensitivity in human breast epithelial cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Higgins MJ
  • 雑誌名: Cancer Biology & Therapy 巻: 11巻 ページ: 358-367
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel Metastasis-Related Gene CIM Functions in the Regulation of Multiple Cellular Stress-Response Pathways. (2010)
  • 著者名/発表者名: Yanagisawa K, Konishi H, Arima C, Tomida S, Takeuchi T, Shimada Y, Yatabe Y, Mitsudomi T, Osada H, Takahashi T.
  • 雑誌名: Cancer Res 巻: 70 号: 23 ページ: 9949-58
  • DOI: 10.1158/0008-5472.can-10-1055
  • 査読あり
• [雑誌論文] Knock in of the AKT1 E17K mutation in human breast epithelial cells does not recapitulate oncogenic PIK3CA mutations. (2010)
  • 著者名/発表者名: Lauring J, Cosgrove DP, Fontana S, Gustin JP, Konishi H, Abukhdeir AM, Garay JP, Mohseni M, Wang GM, Higgins M, Gorkin D, Reis M, Vogelstein B, Polyak K, Cowherd M, Buckhaults PJ, Park BH.
  • 雑誌名: Oncogene 巻: 29 号: 16 ページ: 2337-45
  • DOI: 10.1038/onc.2009.516
  • 査読あり
• [雑誌論文] Knock in of the AKT1 E17K mutation in human breast epithelial cells does not recapitulate oncogenic PIK3CA mutations (2010)
  • 著者名/発表者名: Lauring J
  • 雑誌名: Oncogene 巻: 29巻 ページ: 2337-2345
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel Metastasis-Related Gene CIM Functions in the Regulation of Multiple Cellular Stress-Response Pathways (2010)
  • 著者名/発表者名: Yanagisawa K
  • 雑誌名: Cancer Research 巻: 70巻 ページ: 9949-9958
  • 査読あり
• [学会発表] 三酸化砒素はTRIF依存性経路を抑制しLPS刺激後のRAW264.7細胞からの一酸化窒素の産生を抑制する (2012)
  • 著者名/発表者名: 高橋美裕希
  • 学会等名: 第71回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: ロイトン札幌（北海道）
• [学会発表] Arsenic exposure accelerates Angiotensin II-mediated Ca2+ signaling in mouse aortic endothelial cells by upregulation of AT1 receptor (2012)
  • 著者名/発表者名: Hossain E
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場（福岡県）
• [学会発表] 三酸化ヒ素はSTAT1の活性化を阻害しRAW264.7細胞からの二重鎖RNA刺激によるNO産生を抑制する (2012)
  • 著者名/発表者名: 太田明伸
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場（福岡県）
• [学会発表] A comparative investigation of the long-term transcriptional activity of constitutive promoters placed in plasmids and adeno-associated viral vectors (2012)
  • 著者名/発表者名: Damdindorj L
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場（福岡県）
• [学会発表] PIGA遺伝子を利用したヒト体細胞株の遺伝子ターゲッティング効率の測定 (2012)
  • 著者名/発表者名: シバスンダラン・カルナン
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場（福岡県）
• [学会発表] 抗生剤耐性遺伝子-EGFP融合遺伝子を用いたヒト体細胞株の遺伝子ターゲッティング効率の定量 (2012)
  • 著者名/発表者名: 小西裕之
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡国際会議場（福岡県）
• [学会発表] A mutation in a single BRCA1 allele leads to genomic instability in human breast epithelial cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Konishi H
  • 学会等名: 第70回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場(愛知県)
  • 年月日: 2011-10-04
• [学会発表] CCL8濃度とCCL8陽性細胞の増加はマウス肺のGVHD病態と密接に関与する (2011)
  • 著者名/発表者名: 太田明伸
  • 学会等名: 第70回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋国際会議場(愛知県)
  • 年月日: 2011-10-04
• [学会発表] ヒト体細胞株におけるPIGA遺伝子を利用した遺伝子ターゲッティング効率定量系の作成 (2011)
  • 著者名/発表者名: Sivasundaram Karnan
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館(京都府)
  • 年月日: 2011-09-24
• [学会発表] BRCA1ヘテロ変異によってヒト乳腺上皮細胞にゲノム不安定性が発生する (2011)
  • 著者名/発表者名: 小西裕之
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館(京都府)
  • 年月日: 2011-09-22
• [学会発表] A new protocol of somatic cell gene targeting in human cell lines and its application to breast cancer research (2010)
  • 著者名/発表者名: Konishi H
  • 学会等名: 第15回日韓がんワー クショップ
  • 発表場所: 仁川シェラトンホテル(仁川、大韓民国)
  • 年月日: 2010-12-22
• [学会発表] A new protocol of somatic cell gene targeting in human cell lines and its application to breast cancer research (2010)
  • 著者名/発表者名: Konishi H
  • 学会等名: The 15^<th> Japan-Korea Cancer Research Workshop
  • 発表場所: Sheraton Incheon Hotel (Incheon, Korea)
  • 年月日: 2010-12-22
• [学会発表] ヒト培養細胞遺伝子改変の新しい技術を用いた癌関連遺伝子の機能解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小西裕之
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会第83回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場(兵庫県)
  • 年月日: 2010-12-07
• [学会発表] ヒト培養細胞遺伝子改変の新しい技術を用いた癌関連遺伝子の機能解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小西裕之
  • 学会等名: 第83回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸国際展示場(兵庫県)
  • 年月日: 2010-12-07
• [学会発表] 細胞外ストレス応答を制御する新規肺がん転移関連遺伝子CIMの機能解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 柳澤聖
  • 学会等名: 第69回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 大阪国際会議場(大阪府)
  • 年月日: 2010-09-23
• [学会発表] 細胞外ストレス応答を制御する新規肺がん転移関連遺伝子CIMの機能解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 柳澤聖
  • 学会等名: 第69回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 大阪国際会館(大阪府)
  • 年月日: 2010-09-23
• [学会発表] ヒト培養細胞遺伝子改変の新技術を用いた癌関連遺伝子の機能解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小西裕之
  • 学会等名: 第69回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 大阪国際会議場(大阪府)
  • 年月日: 2010-09-22
• [学会発表] ヒト培養細胞遺伝子改変の新技術を用いた癌関連遺伝子の機能解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 小西裕之
  • 学会等名: 第69回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 大阪国際会館(大阪府)
  • 年月日: 2010-09-22