人工染色体ベクターを活用した遺伝子改変動物の開発

• 研究課題/領域番号: 22580320
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 応用動物科学
• 研究機関: 山口大学
• 研究代表者: 音井 威重 山口大学, 共同獣医学部, 教授 (30311814)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円); 2012年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円); 2011年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2010年度: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円)
• キーワード: 遺伝子改変動物 / 人工染色体 / クローン / 蛍光タンパク質 / ネコ / 胚発育 / ベクター

研究概要

ネコ胎児線維芽細胞に蛍光タンパク質(GFP)遺伝子を搭載した人工染色体(HAC)ベクターを移入した結果、2 つの細胞系が確立できた。この細胞を核として、除核卵母細胞と融合・再構築した。融合時間(30 および 60 μsec)を比較した結果、短時間(30 μsec)での融合が有意に胚盤胞形成率を増加させた。さらに HAC ベクター細胞由来クローン胚を 13頭のレシピエントに移植した結果、移植後 62 日目に 1 頭の子猫(74g)を作出する事に成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Histone deacetylase inhibitor improves the development and acetylation levels of cat cow interspecies cloned embryos (2013)
  • 著者名/発表者名: Wittayarat, M., Sato, Y., Do, T.K.L., Morita, Y., Chatdarong, K., Techakumphu, M., Taniguchi, M. and Otoi, T.
  • 雑誌名: Cellular Reprogramming
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cell cycle analysis and interspecies nuclear transfer of cat cells treated with chemical inhibitors (2013)
  • 著者名/発表者名: Wittayarat, M., Fujiwara, A., Chatdarong, K., Techakumphu, M., Sato, Y., Tanihara, F., Morita, Y., Taniguchi, M. and Otoi, T
  • 雑誌名: Acta Veterinaria Hungarica
  • 査読あり
• [雑誌論文] The effect of relaxin supplementation of in vitro maturation medium on the development of cat oocytes obtained from ovaries stored at 4 °C (2013)
  • 著者名/発表者名: Luu, V.V., Hanatate, K., Tanihara, F., Sato, Y., Do, T.K.L., Taniguchi, M., and Otoi, T.
  • 雑誌名: Reproductive Biology
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparison of activation ability between feline and bovine oocytes (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanihara, F., Kaedei, Y., Namula, Z., Luu, V.V., Sato, Y., Wittayarat, M., Taniguchi, M. and Otoi, T
  • 雑誌名: Acta Veterinaria Hungarica
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cell cycle synchronization of skin fibroblast cells in four species of family Felidae (2013)
  • 著者名/発表者名: Wittayarat, M., Thongphakdee, A., Saikhun, K., Chatdarong, K., Otoi, T.and Techakumphu, M
  • 雑誌名: Reproduction in Domestic Animals 巻: 48 ページ: 305-310
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cell cycle synchronization of skin fibroblast cells in four species of family Felidae. (2013)
  • 著者名/発表者名: Wittayarat, M.
  • 雑誌名: Reproduction in Domestic Animals 巻: 48 号: 2 ページ: 305-310
  • DOI: 10.1111/j.1439-0531.2012.02149.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development and subsequent cryotolerance of domestic cat embryos cultured in serum-free and serum-containing media (2011)
  • 著者名/発表者名: Murakami, M., Dong, Y.J., Suzuki, T., Taniguchi, M., Kaedei, Y., Sato, Y., Tanihara, F. and Otoi, T
  • 雑誌名: Cryobiology 巻: 63 ページ: 170-174
  • 査読あり
• [雑誌論文] Antiviral restriction factor transgenesis in the domestic cat. (2011)
  • 著者名/発表者名: Wongsrikeao, P., Saenz, D., Rinkoski, T., Otoi, T. and Poeschla, E
  • 雑誌名: Nature Methods 巻: 8 ページ: 853-859
  • 査読あり
• [雑誌論文] Antiviral restriction factor transgenesis in the domestic cat (2011)
  • 著者名/発表者名: Wongsrikeao, P., et al
  • 雑誌名: Nature Methods 巻: 8 号: 10 ページ: 853-859
  • DOI: 10.1038/nmeth.1703
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vitro development of cat interspecies nuclear transfer using pig's and cow's cytoplasm. (2010)
  • 著者名/発表者名: Kaedei, Y.
  • 雑誌名: B.Vet.I.Pulawy 巻: 54 ページ: 405-408
  • 査読あり
• [学会発表] TEffect of trichostatin A on in vitro embryo development of interspecies nuclear transfer embryos reconstructed from cat donor nuclei and bovine cytoplasm. 39th Annual Conference of the IETS (2013)
  • 著者名/発表者名: Wittayarat, M., Namula, Z., Luu, V. V., Do, L. T. K., Sato, Y., Taniguchi, M. and Otoi
  • 学会等名: 39th Annual Conference of the IETS
  • 発表場所: Hannover, Germany
  • 年月日: 2013-01-20
• [学会発表] Effects of ovary storage time on the quality and meiotic competence of cat oocytes (2012)
  • 著者名/発表者名: Luu, V.V., et al
  • 学会等名: 38回国際胚移植学会
  • 発表場所: Phoenix AZ USA
  • 年月日: 2012-01-09
• [学会発表] Effects of ovary storage time on the quality and meiotic competence of cat oocytes (2012)
  • 著者名/発表者名: Luu, V. V., Namula, Z., Kaedei, Y., Tanihara, F. and Otoi, T
  • 学会等名: 38th Annual Conference of the IETS
  • 発表場所: Phoenix, AZ, USA
  • 年月日: 2012-01-08
• [学会発表] ネコ卵母細胞の体外成熟・体外発育に及ぼすリラキシンの添加効果 (2010)
  • 著者名/発表者名: 花立敬祐
  • 学会等名: 150回日本獣医学会
  • 発表場所: 帯広市、帯広畜産大学
  • 年月日: 2010-09-16
• [学会発表] 異なる機序の細胞周期同調剤で処理したネコ体細胞と除核ウシ卵母細胞との融合後の胚発育 (2010)
  • 著者名/発表者名: 藤原彬
  • 学会等名: 150回日本獣医学会
  • 発表場所: 帯広市、帯広畜産大学
  • 年月日: 2010-09-16
• [学会発表] Effect of trichostatin A on in vitro embryo development of interspecies nuclear transfer embryos reconstructed from cat donor nuclei and bovine cytoplasm.
  • 著者名/発表者名: Wittayarat, M.
  • 学会等名: 39th Annual Conference of the IETS
  • 発表場所: Hannover, Germany