オンチップ共発現マイクロアレイによる転写制御ネットワークの精密解析

• 研究課題/領域番号: 22658111
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 応用分子細胞生物学
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 土居 信英 慶應義塾大学, 理工学部, 准教授 (50327673)
• 連携研究者: 柳川 弘志 慶應義塾大学, 理工学部, 訪問教授 (40327672) ; 堀澤 健一 慶應義塾大学, 理工学部, 助教 (70424207)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 3,590千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 390千円); 2011年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2010年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
• キーワード: プロテオーム / 蛋白質 / 遺伝子 / バイオテクノロジー / 発現制御

研究概要

プロテインマイクロアレイは、1枚のスライド上に数千種類のタンパク質を固定したもので、大規模なタンパク質相互作用の検出などに利用されている。我々は、鋳型DNAと抗体をスライド上に固定し、スライド上でタンパク質を合成・捕捉するオンチップ転写翻訳マイクロアレイを開発した。さらに我々は、1つのスポット内で2種類のタンパク質を同時に発現させ、相互作用解析を行うオンチップ共発現マイクロアレイを開発した。この手法では解析するタンパク質をマトリックス状に組み合わせることで、1枚のスライド上で多対多の相互作用解析が可能となる。この系を用いて、転写因子Junとその結合候補因子群をモデルとして、タンパク質間およびタンパク質・DNA相互作用の検出に成功した。

研究成果

• [雑誌論文] DNA display selection of peptide ligands for a full-length human G protein-coupled receptor on CHO-K1 cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Doi, N., Yamakawa, N., Matsumoto, H., Yamamoto, Y., Nagano, T., Matsumura, N., Horisawa, K., Yanagawa, H.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 7
  • 査読あり
• [雑誌論文] DNA display selection of peptide ligands for a full-length human G protein-coupled receptor on CHO-K1 cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Doi,N.,Yamakawa,N.,Matsumoto,H.,Yamamoto,Y.,Nagano,T.,Matsumura,N.,Horisawa,K.,Yanagawa,H.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 7 号: 1 ページ: 1-8
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0030084
  • 査読あり
• [学会発表] Translationally-regulated proteomics using biotinylated puromycin (2011)
  • 著者名/発表者名: 大川皓司, 堀澤健一, 柳川弘志, 土居信英
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] オンチップ共発現マイクロアレイによる転写制御ネットワーク解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 早坂俊二, 井上鈴代, 堀澤健一, 柳川弘志, 土居信英
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2010-12-08