| 研究課題/領域番号 |
22K20894
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| 研究種目 |
研究活動スタート支援
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
0902:内科学一般およびその関連分野
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
Nguyen・Minh・Thuy 自治医科大学, 医学部, ポスト・ドクター (20964191)
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| 研究期間 (年度) |
2022-08-31 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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| キーワード | CRISPR-Cas13a / Bacteriophage / gut microbe / Bacteroides fragilis / Identification |
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| 研究開始時の研究の概要 |
Enterotoxigenic Bacteroides fragilis (ETBF) is the cause of inflammatory diarrhea of the colon and intestinal cancer. 5-20% of the world population has bft gene-positive asymptomatic ETBF detected in the gut microbiota. In this study, we developed an identification system that selectively kills and identifies ETBF by introducing CRISPR-Cas13a, which targets the bft toxin gene, into the phage capsid. The results of this application establish a fast and easy genotyping method that does not require nucleic acid amplification.
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| 研究成果の概要 |
本申請では、配列特異的な殺菌活性を持つ抗菌カプシドを用いて、標的遺伝子であるbft遺伝子陽性のエンテロトキシン産生Bacteroides fragilis（ETBF）の簡易検出法の確立を目指した。臨床分離B. fragilis 310株からマイトマイシンを用いた溶原性ファージ誘発した。臨床分離B. fragilis 73株に対して1.36から5.47％の宿主感染域を示すファージ5個を分離した。ファージ同定は、TEMによる形態観察と全ゲノム配列により実施した。また、bft遺伝子を標的とした合計39個のガイドRNAを設計した。現在、抗菌カプシド構築法と標的細菌の鑑別法の最適化を進めている。
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| 研究成果の学術的意義や社会的意義 |
本研究の成果は、配列特異的な抗菌カプシドを用いて標的遺伝子であるbft遺伝子を持つETBFのみを、迅速かつ安価に鑑別できる簡易検出法の確立である。申請者は、配列特異的な抗菌カプシドを構築するために、臨床分離Bacteroides fragilisの細菌ゲノム上から効率的にプロファージ（溶原性ファージ）の誘発法を確立した。本技術は、核酸の増幅を必要としない検体細菌に構築した抗菌カプシドを共培養することで細菌の生死を黙示確認するのみで鑑別できる。この技術は、特別な装置や煩雑な手技が不要であるため、技術導入の負担が少なく幅広い医療機関で導入することができると期待される。
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