がん診断のためのイメージング抗体の作製技術の開発

• 研究課題/領域番号: 23650271
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 医用生体工学・生体材料学
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 柳川 弘志 慶應義塾大学, 理工学部, 訪問教授 (40327672)
• 研究分担者: 田畠 典子 慶應義塾大学, 理工学研究科, 特任准教授 (60260080)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2012年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2011年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
• キーワード: iPS細胞 / がん幹細胞 / in vitro virus法 / CD44 / in vivo imaging / CD138

研究概要

CD44は接着分子としてがん幹細胞の自己複製能を維持するために必要な因子の一つと考えられていることから人工がん幹細胞が細胞プレートへの接着を阻害する一本鎖抗体のセレクションをIVV法により行った。全部で7ラウンドの選択実験後、得られた2つのクローンAXT7-30とAXT7-12はAXT細胞の細胞プレートへの接着を阻害した。CytoTox-Glo Cytotoxicity Assayの結果、強い殺細胞活性を有し(IC50=3nM)、AXT7-30の方が3倍強い活性を有していた。そこでこの一本鎖抗体AXT7-30を使って蛍光ラベル化抗体を作成した。tdTomatoは非常に明るい赤色蛍光タンパク質であり、tdTomato蛍光ラベル化されたAXT7-30を用いて免疫染色したところAXT細胞を明瞭に蛍光観察することができた。現在この蛍光ラベル化一本鎖抗体の担がんマウス投与を実施中であり、二光子励起蛍光顕微鏡を用いた体内動態の画像化によりがん細胞への集積を解析中である。

研究成果

• [雑誌論文] A phthalimide derivative that inhibits centrosomal clustering is effective on multiple myeloma (2012)
  • 著者名/発表者名: Shiheido, H., Terada, F., Tabata, N., Hayakawa, I., Matsumura, N., Takashima, H., Ogawa, Y., Du,W., Yamada, T., Shoji, M., Sugai, T., Doi, N.,Iijima, S., Hattori, Y., Yanagawa, H.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 7 号: 6 ページ: e38878-e38878
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0038878
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vitro selection of Fab fragments by mRNA display and gene-linking emulsion PCR (2012)
  • 著者名/発表者名: Sumida, T., Yanagawa, H., Doi, N.
  • 雑誌名: J. Nucleic Acids 巻: 2012 ページ: 371379-371379
  • DOI: 10.1155/2012/371379
  • 査読あり
• [雑誌論文] DNA display selection of peptide ligands for a full-length human G protein-coupled receptor on CHO-K1 cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Doi,N.,Yamakawa,N.,Matsumoto,H.,Yamamoto,Y.,Nagano,T.,Matsumura,N.,Horisawa,K.,Yanagawa,H.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 7 号: 1 ページ: 1-8
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0030084
  • 査読あり
• [学会発表] In vitroevolution of high-affinity anti-CCR5 single chain Fv via neutral drift libraries (2011)
  • 著者名/発表者名: Sato, R., Doi,N., Misumi,S., Shoji,S., Matsushima, S., Yokochi, S., Yanagawa, H.
  • 学会等名: 34th MBSJ 2011
  • 発表場所: Yokohama
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] In vitroselection of anti-CD44v scFv inhibiting CD44v-xCT interaction (2011)
  • 著者名/発表者名: Umezawa,H., Tabata,N., Sakuma,Y., Takenaka,Y., Matsumoto,Y., Doi,N., Nagano, O., Saya,H., Yanagawa, H.
  • 学会等名: 34th MBSJ 2011
  • 発表場所: Yokohama
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] In vitroselection of Fc receptor-binding peptides using in vitro virus method (2011)
  • 著者名/発表者名: Mihara, M., Sumida, T., Sakuma, Y., Tabata, N., Horisawa, K., Yanagawa, H., Doi, N.
  • 学会等名: 34th MBSJ 2011
  • 発表場所: Yokohama
  • 年月日: 2011-12-11
• [学会発表] Selection of scFv inhibiting adhesion of induced cancer stem cells by in vitro virus (IVV) method (2011)
  • 著者名/発表者名: Tabata, N., Sakuma, Y., Shimizu, T., Saya, H., Doi, N., Yanagawa, H.
  • 学会等名: 34th MBSJ 2011
  • 発表場所: Yokohama
  • 年月日: 2011-12-11
• [学会発表] In vitro evolution of high-affinity anti-CCR5 single chain Fv via neutral drift libraries (2011)
  • 著者名/発表者名: 2. Ryota Sato，Nobuhide Doi，Shogo Misumi，Shozo Shoji，Koji Matsushima，Shoji Yokochi，and Hiroshi Yanagawa
  • 学会等名: 34th MBSJ 2011
  • 発表場所: Yokohama
• [学会発表] In vitro selection of anti-CD44v scFv inhibiting CD44v-xCT interaction (2011)
  • 著者名/発表者名: 1. Hiroki Umezawa，Noriko Tabata，Yuko Sakuma，Yuma Takenaka，Yoshinori Matsumoto，Nobuhide Doi，Osamu Nagano，Hideyuki Saya，and Hiroshi Yanagawa
  • 学会等名: 34th MBSJ 2011
  • 発表場所: Yokohama
• [学会発表] In vitro selection of Fc receptor-binding peptides using in vitro virus method
  • 著者名/発表者名: Mihara M, Sumida T, Sakuma Y, Tabata N, Horisawa K, Yanagawa H, Doi N
  • 学会等名: 35th MBSJ 2012
  • 発表場所: Fukuoka
• [学会発表] Selection of scFv inhibiting adhesion of induced cancer stem cells by in vitro virus (IVV) method
  • 著者名/発表者名: Tabata N, Sakuma Y, Shimizu T, Saya H, Doi N, Yanagawa H
  • 学会等名: 35th MBSJ 2012
  • 発表場所: Fukuoka
• [図書] Chapter 4. Applications of the In Vitro Virus (IVV) Method for Various Protein Functional Analyses, IN:Protein Engineering-Technology and Application, ed. T. Ogawa, pp.85-110 (2012)
  • 著者名/発表者名: Tabata N, Horisawa K, Yanagawa H
  • 総ページ数: 187
  • 出版者: InTech, Rijeka, Croatia
• [図書] Chemical Synthetic Biology (2011)
  • 著者名/発表者名: Doi, N., Kakukawa, K., Oishi, Y., Yanagawa, H. John Wiley & Sons
  • 出版者: Ltd.
• [図書] Neural Stem Cells and Therapy (2011)
  • 著者名/発表者名: Horisawa,K., Yanagawa, H
  • 出版者: InTech
• [図書] Chemical Synthetic Biology (2011)
  • 著者名/発表者名: Nobuhide Doi, Koichi Kakukawa, Yo Oishi, and Hiroshi Yanagawa
  • 総ページ数: 8
  • 出版者: High solubility of random-sequence proteins consisting of five kinds of primitive amino acids
• [図書] Drug Delivery System (2011)
  • 著者名/発表者名: Hiroshi Yanagawa
  • 総ページ数: 13
  • 出版者: Development of IVV method into drug discovery
• [図書] Neural Stem Cells and Therapy (2011)
  • 著者名/発表者名: Kenichi Horisawa and Hiroshi Yanagawa
  • 総ページ数: 18
  • 出版者: The Musashi proteins in neural stem cell/progenitor cells