| 研究課題/領域番号 |
23770155
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 研究分野 |
機能生物化学
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
樺山 一哉 東海大学, 糖鎖科学研究所, 准教授 (00399974)
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| 研究期間 (年度) |
2011 – 2012
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| 研究課題ステータス |
完了 (2012年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2012年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2011年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
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| キーワード | イメージング / 糖脂質 / マイクロドメイン / 膜受容体 / ガングリオシド / 蛍光顕微鏡 / 成長因子受容体 / 糖鎖 / 生細胞イメージング / 脂質タンパク質相互作用 / FCS / 蛍光相関スペクトル法 / 共焦点 / スフィンゴ脂質 / スフィンゴ糖脂質 / 生体膜 / 脂質ラフト |
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| 研究概要 |
脂質二重層は、細胞膜の基本的構成要素である。近年の研究によれば、多様な脂質分子集団は無秩序に分布しているのではなく、例えば、細胞膜表面に局在するスフィンゴ糖脂質とコレステロールとの安定した会合により、他の脂質領域とは異なったマイクロドメイン(脂質ラフト)が存在していると考えられている(脂質ラフト仮説)。本研究では脂質ラフトの組成変化が膜受容体分子の局在およびミグナリングに影響を及ぼすメカニズムに関する研究を行った。具体的には、光退色後蛍光回復法(FRAP)および共焦点顕微鏡の光電子増倍管をもいいた蛍光相関スペクトル法(point-scan FCS)などにより膜脂質変化が膜受容体の動態に関与することを数値化して解析を行った。脂質ラフトの組成変化の方法としては、糖転移酵素を遺伝子に再構成した細胞を数種類用いて、上皮成長因子受容体の活性測定および糖脂質生合成阻害剤のD-PDMPを用いた検証を行った。その結果、脂質ラフトを形成していると考えられる糖脂質の組成変化は受容体の活性および膜流動性に影響することが実証できた。また、糖脂質とタンパク質の相互作用を検出する新しい手法として蛍光相互相関スペクトル法(point-scan FCS)の初期検討を行い、市販の共焦点顕微鏡でガングリオシドGM1とその結合分子であるコレラトキシンの相互作用を検出することができた。
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