安定同位体標識法による膵癌新規抗癌剤耐性因子の解明と血中診断マーカーへの臨床応用

• 研究課題/領域番号: 24501338
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 腫瘍診断学
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 佐藤 守 千葉大学, 医学部附属病院, 寄附研究部門教員 (20401002)
• 研究分担者: 野村 文夫 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (80164739) ; 宮崎 勝 千葉大学, 大学院医学研究院, 教授 (70166156) ; 吉富 秀幸 千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (60375631) ; 曽川 一幸 麻布大学, 生命・環境化学部, 講師 (50436440)
• 連携研究者: 小寺 義男 北里大学, 理学部, 准教授 (60265733) ; 高野 重紹 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (20436380)
• 研究協力者: 川島 祐介 理化学研究所, 統合生命医科学研究センター, 研究員
• 研究期間 (年度): 2012-04-01 – 2015-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2014年度)
• 配分額: 5,330千円 (直接経費: 4,100千円、間接経費: 1,230千円); 2014年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2013年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2012年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
• キーワード: プロテオーム解析 / プロテオミクス解析 / 抗癌剤耐性 / 膵臓癌 / 培養細胞 / 培養上清 / SILAC

研究成果の概要

安定同位体標識した膵癌感受性株、耐性株の発現タンパク質の比較解析を行った。細胞分画、可溶化度の違いでタンパク質分画を行い、新規ジェムシタビン耐性因子の同定を行った。発現変動が２倍以上認められたタンパク質は細胞分画で344、可溶性の差では118であった。特に変化の大きかった40タンパク質についてはWBによる検証を行った結果、質量分析の結果と同様の結果を得ることができた。また、細胞から分泌・逸脱する培養上清中のタンパク質の比較定量・同定を試みた結果、発現比が２倍以上の35タンパク質を同定することができた。

研究成果

• [雑誌論文] Urinary albumin and transferrin as early diagnostic markers of chronic kidney disease. (2015)
  • 著者名/発表者名: Maeda H, Sogawa K, Sakaguchi K, Abe S, Sagizaka W, Mochizuki S, Horie W, Watanabe T, Shibata Y, Satoh M, Sanda A, Nomura F, Suzuki J.
  • 雑誌名: J Vet Med Sci. 巻: -
  • NAID: 130005094672
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Haploinsufficiency of the c-myc transcriptional repressor FIR, as a dominant negative-alternative splicing model, promoted p53-dependent T-cell acute lymphoblastic leukemia progression by activating Notch1. (2015)
  • 著者名/発表者名: Matsushita K, Kitamura K, Rahmutulla B, Tanaka N, Ishige T, Satoh M, Hoshino T, Miyagi S, Mori T, Itoga S, Shimada H, Tomonaga T, Kito M, Nakajima-Takagi Y, Kubo S, Nakaseko C, Hatano M, Miki T, Matsuo M, Fukuyo M, Kaneda A, Iwama A, Nomura F.
  • 雑誌名: Oncotarget. 巻: 6 ページ: 5102-5117
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Serum cytokine and chemokine profiles in patients with chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy. (2015)
  • 著者名/発表者名: Beppu M, Sawai S, Misawa S, Sogawa K, Mori M, Ishige T, Satoh M, Nomura F, Kuwabara S.
  • 雑誌名: J Neuroimmunol. 巻: 279 ページ: 7-10
  • 査読あり
• [雑誌論文] Increased cell proliferation and differential protein expression induced by low-level Er:YAG laser irradiation in human gingival fibroblasts: proteomic analysis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Ogita M, Tsuchida S, Aoki A, Satoh M, Kado S, Sawabe M, Nanbara H, Kobayashi H, Takeuchi Y, Mizutani K, Sasaki Y, Nomura F, Izumi Y.
  • 雑誌名: Lasers Med Sci. 巻: -
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nuclear accumulation of annexin A2 contributes to chromosomal instability by coilin-mediated centromere damage. (2014)
  • 著者名/発表者名: Kazami T, Nie H, Satoh M, Kuga T, Matsushita K, Kawasaki N, Tomonaga T, Nomura F.
  • 雑誌名: Oncogene. 巻: -
  • 査読あり
• [雑誌論文] How proteomic ApoE serotyping could impact Alzheimer's disease risk assessment: genetic testing by proteomics. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nishimura M, Satoh M, Matsushita K, Nomura F.
  • 雑誌名: Expert Rev Proteomics. 巻: 11 ページ: 405-407
  • 査読あり
• [雑誌論文] Moesin is a possible target molecule for cytomegalovirus-related Guillain-Barré syndrome. (2014)
  • 著者名/発表者名: Sawai S, Satoh M, Mori M, Misawa S, Sogawa K, Kazami T, Ishibashi M, Beppu M, Shibuya K, Ishige T, Sekiguchi Y, Noda K, Sato K, Matsushita K, Kodera Y, Nomura F, Kuwabara S.
  • 雑誌名: Neurology. 巻: 83 ページ: 113-117
  • 査読あり
• [雑誌論文] Alternative splicing of FBP-interacting repressor coordinates c-Myc, P27Kip1/cyclinE and Ku86/XRCC5 expression as a molecular sensor for bleomycin-induced DNA damage pathway. (2014)
  • 著者名/発表者名: Rahmutulla B, Matsushita K, Satoh M, Seimiya M, Tsuchida S, Kubo S, Shimada H, Ohtsuka M, Miyazaki M, Nomura F.
  • 雑誌名: Oncotarget. 巻: 5 ページ: 2404-2417
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Direct application of MALDI-TOF mass spectrometry to cerebrospinal fluid for rapid pathogen identification in a patient with bacterial meningitis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Segawa S, Sawai S, Murata S, Nishimura M, Beppu M, Sogawa K, Watanabe M, Satoh M, Matsutani T, Kobayashi M, Iwadate Y, Kuwabara S, Saeki N, Nomura F.
  • 雑誌名: Clin Chim Acta. 巻: 435 ページ: 59-61
  • 査読あり
• [雑誌論文] Human apolipoprotein e resequencing by proteomic analysis and its application to serotyping. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nishimura M, Satoh M, Nishimura S, Kakinuma S, Sato K, Sawai S, Tsuchida S, Kazama T, Matsushita K, Kado S, Kodera Y, Nomura F.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 9(1)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Glucoamylase is a major allergen of Schizophyllum commune. (2014)
  • 著者名/発表者名: Toyotome T, Satoh M, Yahiro M, Watanabe A, Nomura F, Kamei K.
  • 雑誌名: Clin Exp Allergy 巻: 44(3) ページ: 450-457
  • 査読あり
• [雑誌論文] Increased concentrations of apo A-I and apo A-II fragments in the serum of patients with hepatocellular carcinoma by magnetic beads-assisted MALDI-TOF mass spectrometry. (2014)
  • 著者名/発表者名: Liu Y, Sogawa K, Sunaga M, Umemura H, Satoh M, Kazami T, Yoshikawa M, Tomonaga T, Yokosuka O, Nomura F.
  • 雑誌名: Am J Clin Pathol 巻: 1(1) ページ: 52-61
  • 査読あり
• [雑誌論文] The FLS (fatty liver Shionogi) mouse reveals local expressions of lipocalin-2, CXCL1 and CXCL9 in the liver with non-alcoholic steatohepatitis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Semba T, Nishimura M, Nishimura S, Ohara O, Ishige T, Ohno S, Nonaka K, Sogawa K, Satoh M, Sawai S, Matsushita K, Imazeki F, Yokosuka O, Nomura F.
  • 雑誌名: BMC Gastroenterol 巻: 13 ページ: 120-120
  • 査読あり
• [雑誌論文] Application of quantitative proteomic analysis using tandem mass tags for discovery and identification of novel biomarkers in periodontal disease. (2013)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida S, Satoh M, Kawashima Y, Sogawa K, Kado S, Sawai S, Nishimura M, Ogita M, Takeuchi Y, Kobyashi H, Aoki A, Kodera Y, Matsushita K, Izumi Y, Nomura F.
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 13(15) ページ: 2339-50
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prohibitin and its rapidly emerging role as a biomarker of systemic malignancies-reply. (2013)
  • 著者名/発表者名: Guo F, Hiroshima K, Wu D, Satoh M, Abulazi M, Nomura F, Yoshino I, Tomonaga T, Nakatani Y
  • 雑誌名: Hum Pathol 巻: 44(4) ページ: 679-80
  • 査読あり
• [雑誌論文] Overexpression of hydroxymethylglutaryl CoA synthase 2 and 2,4-dienoyl-CoA reductase in rat pancreas following chronic alcohol consumption. (2013)
  • 著者名/発表者名: Satoh M, Haruta-Satoh E, Yamada M, Kado S, Nomura F
  • 雑誌名: Pancreas. 巻: 42(3) ページ: 475-82
  • 査読あり
• [雑誌論文] Establishment and application of a high-quality comparative analysis strategy for the discovery and small-scale validation of low-abundance biomarker peptides in serum based on an optimized novel peptide extraction method. (2013)
  • 著者名/発表者名: Sasito T, Kawashima Y, Minamida S, Matsumoto K, Araki K, Matsui T, Satoh M, Nomura F, Iwamura M, Maeda T, Kodera Y
  • 雑誌名: Journal of Electrophoresis. 巻: 57 ページ: 1-9
  • NAID: 130003364779
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cyclic sample pooling using two-dimensional liquid chromatography system enhances coverage in shotgun proteomics (2013)
  • 著者名/発表者名: Kawashiraa Y, Satoh M, Saito T, Matsui T, Nomura F, Matsumoto H, Kodera Y
  • 雑誌名: Biomedical Chromatography 巻: 27 号: 6 ページ: 691-694
  • DOI: 10.1002/bmc.2864
  • 査読あり
• [雑誌論文] Enhanced recovery of lyophilized peptides in shotgun proteomics by using an LC-ESI-MS compatible surfactant (2013)
  • 著者名/発表者名: Kawashima Y, Takahashi N, Satoh M, Saito T, Kado S, Nomura F, Matsumoto H, Kodera Y
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 13 号: 5 ページ: 751-755
  • DOI: 10.1002/pmic.201200462
  • 査読あり
• [雑誌論文] Combined proteomic analysis of liver tissue and serum in chronically alcohol-fed rats (2013)
  • 著者名/発表者名: Yamada M, Satoh M, Seimiya M, Sogawa K, Itoga S, Tomonaga T, Nomura F
  • 雑誌名: Alcohol Clin Exp Res 巻: 37 号: s1
  • DOI: 10.1111/j.1530-0277.2012.01883.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Preanalytical evaluation of serum 25-hydroxyvitamin D3 and 25-hydroxyvitamin D2 measurements using LC-MS/MS. (2013)
  • 著者名/発表者名: Mochizuki A, Kodera Y, Saito T, Satoh M, Sogawa K, Nishimura M, Seimiya M,Kubota M, Nomura F.
  • 雑誌名: Clin Chim Acta. 巻: 420 ページ: 114-120
  • DOI: 10.1016/j.cca.2012.10.041
  • 査読あり
• [雑誌論文] The application of a three-step serum proteome analysis for the discovery and identification of novel biomarkers of hepatocellular carcinoma. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kimura A, Sogawa K, Satoh M, Kodera Y, Yokosuka O, Tomonaga T, Nomura F.
  • 雑誌名: Int J Proteomics. 巻: 2012: ページ: 623190-623190
  • DOI: 10.1155/2012/623190
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of a Novel Biomarker for Biliary Tract Cancer Using Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry. (2012)
  • 著者名/発表者名: Kikkawa S, Sogawa K, Satoh M, Umemura H, Kodera Y, Matsushita K, Tomonaga T, Miyazaki M, Yokosuka O, Nomura F.
  • 雑誌名: Int J Proteomics 巻: 108 ページ: 609-609
  • DOI: 10.1155/2012/108609
  • 査読あり
• [雑誌論文] Low-density lipoprotein receptorrelated protein-1 (LRP-1) mediates autophagy and apoptosis caused by Helicobacter pyloriVacA (2012)
  • 著者名/発表者名: Yahiro, K., Suzuki, H., et al.
  • 雑誌名: J. Biol. Chem 巻: 287(37) 号: 37 ページ: 31104-15
  • DOI: 10.1074/jbc.m112.387498
  • 査読あり
• [雑誌論文] Akt/mTOR signaling pathway is crucial for gemcitabine resistance induced by Annexin II in pancreatic cancer cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Kagawa S, Takano S, Yoshitomi H, Kimura F, Satoh M, Shimizu H, Yoshidome H, Ohtsuka M, Kato A, Furukawa K, Matsushita K, Nomura F, Miyazaki M
  • 雑誌名: T Surg Res 巻: 178 号: 2 ページ: 758-767
  • DOI: 10.1016/j.jss.2012.05.065
  • 査読あり
• [雑誌論文] Proteomic analysis of gingival crevicular fluid for discovery of novel periodontal disease markers. (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida S
  • 雑誌名: Proteomics. 巻: 12(13) 号: 13 ページ: 2190-202
  • DOI: 10.1002/pmic.201100655
  • 査読あり
• [雑誌論文] SAP155-mediated splicing of FUSE-binding protein-interacting repressor serves as a molecular switch for c-myc gene expression (2012)
  • 著者名/発表者名: Matsushita, K., Kajiwara, T., Tamura, M., Satoh, M., Tanaka, N., Tomonaga, T., Matsubara, H., Shimada, H., Yoshimoto, R., Ito, A., Kubo, S., Natsume, T., Levens, D., Yoshida, M., and Nomura, F
  • 雑誌名: Mol. Cancer Res 巻: 10 号: 6 ページ: 787-799
  • DOI: 10.1158/1541-7786.mcr-11-0462
  • 査読あり
• [雑誌論文] Prohibitin in squamous cell carcinoma of the lung: its expression and possible clinical significance. (2012)
  • 著者名/発表者名: Guo F, Hiroshima K, Wu D, Satoh M, Abulazi M, Yoshino I, Tomonaga T, Nomura F, Nakatani Y.
  • 雑誌名: Hum Pathol. 巻: 43(8) 号: 8 ページ: 1282-1288
  • DOI: 10.1016/j.humpath.2011.10.006
  • 査読あり
• [学会発表] 質量分析の基礎知識 (2015)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守
  • 学会等名: 平成26 年度 高度先端的医学セミナー 質量分析に関する研修会
  • 発表場所: 東京都 日本臨床検査技師会館
  • 年月日: 2015-03-14 – 2015-03-15
  • 招待講演
• [学会発表] DAPTAD誘導体化を用いたLC-MS/MSによる血清ビタミンD代謝物の４項目同時定量 (2014)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守、石毛崇之、小川祥二郎、西村基、松下一之、東達也、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] イムノアフィニティー抽出DAPTAD誘導体化LC-MS/MSによる血清25OH-ビタミンDおよび1,25（OH）2-ビタミン Dの同時定量 (2014)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之、佐藤守、小川祥二郎、西村基、土田祥央、澤井摂、松下一之、東達也、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] 前田浩人、前川武大、柴田悠衣、阿部沙織、堀江和香、望月俊輔、渡辺俊文、佐藤守、三田明弘、野村文夫、曽川一幸 (2014)
  • 著者名/発表者名: ネコ慢性腎不全における尿を用いた早期診断マーカーの探索
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] キウイフルーツアレルギーにおけるアレルゲンタンパク質の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 河原彩花、曽川一幸、佐藤守、三田明弘、下条直樹、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] ナッツアレルギーにおけるアレルゲンタンパク質の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 安東圭奈美、曽川一幸、佐藤守、三田明弘、下条直樹、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] プロテオーム解析を用いた歯周病疾患マーカー探索 (2014)
  • 著者名/発表者名: 土田祥央、佐藤守、曽川一幸、川島祐介、石毛崇之､別府美奈子､澤井摂、西村基、小寺義男、松下一之、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] 質量分析計を活用したがん培養細胞の分泌物解析とサイトケラチン断片の探索 (2014)
  • 著者名/発表者名: 陳健嘉、西村基、西村里美、石毛崇之、佐藤守、松下一之、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] MALDI-TOF MSを用いた細菌性髄膜炎の起因菌迅速同定 (2014)
  • 著者名/発表者名: 別府美奈子、澤井摂、瀬川俊介、村田正太、曽川一幸、渡邊正治、西村基、佐藤守、松下一之、野村文夫
  • 学会等名: 第39 回 日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 千葉県 三井ガーデンホテル千葉
  • 年月日: 2014-10-16 – 2014-10-17
• [学会発表] Interactions between SF3b1(SAP155) and FUSE-binding protein-interacting repressor (FIR) links c-Myc and P27Kip1 expression through GeLC-MS analysis (2014)
  • 著者名/発表者名: 松下一之、佐藤守、朝長毅、野村文夫
  • 学会等名: 日本プロテオーム学会2014年会
  • 発表場所: 茨城県 つくば国際会議場
  • 年月日: 2014-07-17 – 2014-07-18
• [学会発表] Differential solublization method to extract low-molecular-weight proteins/peptides for successful serum SRM analyses. (2013)
  • 著者名/発表者名: Satoh M, Kawashima Y, Saito T, Ishibashi M, Sogawa K, Kado S, Kodera Y, Nomura F
  • 学会等名: HUPO
  • 発表場所: Yokohama
• [学会発表] プロテオーム解析から臨床検査の現場を目指して (2013)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守、川島祐介、齋藤達也、石橋真澄、曽川一幸、荷堂清香、小寺義男、野村文夫
  • 学会等名: 日本医用マススペクトル学会
  • 発表場所: 神戸市産業振興センター
• [学会発表] Differential solublization method to extract low-molecular-weight proteins/peptides for successful serum SRM analyses (2013)
  • 著者名/発表者名: Mamoru Satoh, Yusuke Kawashima, Tatsuya Saito, Kazuyuki Sogawa, Sayaka Kado, Yoshio Kodera, Fumio Nomura
  • 学会等名: The 5th Annual Conference on Mass Spectometry Applications to the Clinical Lab 2013
  • 発表場所: San Diego, USA
• [学会発表] ApoE typing from small amounts of blood samples (2013)
  • 著者名/発表者名: Motoi Nishimura, Satomi Nishimura, Mamoru Satoh, Syouko Kakinuma, Kenichi Satoh, Setsu Sawai, Sayaka Kado, Yoshio Kodera, Fumio Nomura
  • 学会等名: The 5th Annual Conference on Mass Spectometry Applications to the Clinical Lab 2013
  • 発表場所: San Diego, USA
• [学会発表] Effects of preanalytical factors on serum 25-hydroxyvitamin D3 and 25-hydroxyvitamin D2 measurements using LC-MS/MS for the clinical laboratory testing (2013)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Mochizuki A, Kodera Y, Saito T, Satoh M, Sogawa K, Nishimura M, Sawai S, Seimiya M, Kubota M, Matsushita K, Nomura F
  • 学会等名: The 5th Annual Conference on Mass Spectometry Applications to the Clinical Lab 2013
  • 発表場所: San Diego, USA
• [学会発表] 診断応用を目指した血清の定量的プロテオミクス (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守、川島祐介、曽川一幸、齋藤達也、荷堂清香、小寺義男、野村文夫
  • 学会等名: 第37回日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 名古屋
  • 招待講演
• [学会発表] 血清よりの Apolipoprotein E (ApoE) タイピング (2012)
  • 著者名/発表者名: 西村基、西村里美、佐藤守、柿沼翔子、佐藤謙一、澤井摂、 荷堂清香、小寺義男、野村文夫
  • 学会等名: 第37回日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: 名古屋
• [学会発表] ジェムシタビン耐性ヒト膵癌細胞株のプロテオーム解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守
  • 学会等名: 第63回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 沖縄
  • 招待講演
• [学会発表] 慢性的アルコール投与ラット膵臓のプロテオーム解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守、佐藤（春田）恵里、山田真子、荷堂清香、野村文夫
  • 学会等名: 第19 回日本遺伝子診療学会
  • 発表場所: 千葉
• [図書] 質量分析の消化器疾患の診療・研究への応用 第2回 MS解析に用いられる機器 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守、曽川一幸、野村文夫
  • 総ページ数: 6
  • 出版者: 先端医学社
• [図書] 総説 定量的質量分析法の最近の進歩 (2012)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守、曽川一幸、野村文夫
  • 総ページ数: 6
  • 出版者: 日本臨床自動化学会