環境ストレスに対する生体応答におけるGABAシステムの多元的役割

• 研究課題/領域番号: 25293052
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 一部基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 環境生理学(含体力医学・栄養生理学)
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 福田 敦夫 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50254272)
• 連携研究者: 秋田 天平 浜松医科大学, 医学部, 准教授 (00522202) ; 渡部 美穂 浜松医科大学, 医学部, 助教 (10399321) ; 秦 健一郎 国立成育医療研究センター, 部長 (60360335) ; 村上 元 浜松医科大学, 医学部, 研究員 (70613727)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 17,160千円 (直接経費: 13,200千円、間接経費: 3,960千円); 2015年度: 5,590千円 (直接経費: 4,300千円、間接経費: 1,290千円); 2014年度: 5,460千円 (直接経費: 4,200千円、間接経費: 1,260千円); 2013年度: 6,110千円 (直接経費: 4,700千円、間接経費: 1,410千円)
• キーワード: GAD67 / タウリントランスポーター / HPA / 神経発生 / GABA / タウリン / 母体ストレス / メチル化 / 正中隆起 / CRH / 細胞移動 / トニックカレント

研究成果の概要

遺伝子・細胞・神経回路レベルでCl-ホメオダイナミクスやマルチモーダルGABAに着眼した。GABA合成酵素GAD67やTauTのヘテロ欠損モデルを用い、母体でのストレス（遺伝的：GAD67，環境的：妊娠・拘束）応答における、視床下部CRH細胞へのGABA細胞の作用、胎仔ストレス（遺伝的：GAD67・TauT，環境的：母体の遺伝的・環境的ストレス）応答における、神経発生・移動・シナプス形成、胎盤機能、視床下部－下垂体－副腎系応答、行動変化を解析した。脳構築、シナプス可塑性、CRH分泌、corticosteron活性、DNAメチル化等のストレス応答におけるGABAの多元的役割が明らかとなった。

研究成果

• [雑誌論文] De novo KCNB1 mutations in infantile epilepsy inhibit repetitive neuronal firing. (2015)
  • 著者名/発表者名: Saitsu, H., T. Akita, J. Tohyama, H. Goldberg-Stern, Y. Kobayashi, R. Cohen, M. Kato, C. Ohba, S. Miyatake, Y. Tsurusaki, M. Nakashima, N. Miyake, A. Fukuda, and N. Matsumoto
  • 雑誌名: Sci Rep 巻: 5 号: 1 ページ: 15199-15199
  • DOI: 10.1038/srep15199
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] KCC2-mediated regulation of respiration-related rhythmic activity during postnatal development in mouse medulla oblongata. (2015)
  • 著者名/発表者名: Okabe A., Shimizu-Okabe C., Arata A., Konishi S., Fukuda A., and Takayama C.
  • 雑誌名: Brain Res. 巻: 1601 ページ: 31-39
  • DOI: 10.1016/j.brainres.2015.01.007
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Development and regulation of chloride homeostasis in the central nervous system. (2015)
  • 著者名/発表者名: Watanabe, M., *Fukuda, A.
  • 雑誌名: Frontiers in Cellular Neuroscience 巻: 9 ページ: 1-14
  • DOI: 10.3389/fncel.2015.00371
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Control of cortical neuronal migration by glutamate and GABA. (2015)
  • 著者名/発表者名: Luhmann, H.J., Kilb, W. and Fukuda, A.
  • 雑誌名: Frontiers in Cellular Neuroscience 巻: 9 ページ: 4-4
  • DOI: 10.3389/fncel.2015.00004
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Activation of glycine receptors modulates spontaneous epileptiform activity in the immature rat hippocampus. (2014)
  • 著者名/発表者名: Chen, R., Okabe, A., Sun, H., Sharopov, S., Hanganu-Opatz, I.L., Kolbaev, S.N., Fukuda, A., Luhmann, H.J.and Kilb, W.
  • 雑誌名: The Journal of Physiology 巻: 592 号: 10 ページ: 2153-2168
  • DOI: 10.1113/jphysiol.2014.271700
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Roles of taurine-mediated tonic GABAA receptor activation in radial migration of neurons in the fetal mouse cerebral cortex. (2014)
  • 著者名/発表者名: Furukawa T, Yamada J, Akita T, Matsushima Y, Yanagawa Y, Fukuda A
  • 雑誌名: Frontiers in Cellular Neuroscience 巻: 8 ページ: 88-88
  • DOI: 10.3389/fncel.2014.00088
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Selective loss of parvalbumin-positive GABAergic interneurons in the cerebral cortex of maternally stressed Gad1-heterozygous mouse offspring. (2014)
  • 著者名/発表者名: Uchida, T., Furukawa, T., Iwata, S., Yanagawa, Y. and *Fukuda, A.
  • 雑誌名: Translational Psychiatry 巻: 4 号: 3 ページ: e371-e371
  • DOI: 10.1038/tp.2014.13
  • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Functional deficiency of MHC class I enhances LTP and abolishes LTD in the nucleus accumbens of mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Edamura, M., Murakami, G., Meng, H., Itakura, M., Shigemoto R., Fukuda, A. and Nakahara, D.
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 9 号: 9 ページ: e107099-e107099
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0107099
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The role of GABA in the regulation of GnRH neurons. (2014)
  • 著者名/発表者名: Watanabe, M., Fukuda, A. and Nabekura, J.
  • 雑誌名: Frontiers in Neuroscience 巻: 8 ページ: 1-9
  • DOI: 10.3389/fnins.2014.00387
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] マルチモーダルGABAによる発振と同期 (2014)
  • 著者名/発表者名: 福田敦夫
  • 雑誌名: Clinical Neuroscience 巻: 32 ページ: 751-756
• [雑誌論文] Activity-dependent endogenous taurine release facilitates excitatory neurotransmission in the neocortical marginal zone of neonatal rats. (2014)
  • 著者名/発表者名: Qian, T., et al.,
  • 雑誌名: Front Cell Neurosci. 巻: 8 ページ: 33-33
  • DOI: 10.3389/fncel.2014.00033
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 胎児脳発達における母体ストレスの影響：特に抑制性神経との関係について. (2014)
  • 著者名/発表者名: 福田敦夫.
  • 雑誌名: ベビーサイエンス 巻: 13 ページ: 2-24
  • NAID: 40020157534
• [雑誌論文] Accumulation of GABAergic neurons, causing a focal ambient GABA gradient, and downregulation of KCC2 are induced during microgyrus formation in a mouse model of polymicrogyria. (2013)
  • 著者名/発表者名: Wang T, Kumada T, Morishima T, Kaneko T, Yanagawa Y, Yoshida S, Fukuda A
  • 雑誌名: Cerebral Cortex 巻: in press 号: 4 ページ: 1088-1101
  • DOI: 10.1093/cercor/bhs375
  • 査読あり
• [雑誌論文] De Novo Mutations in GNAO1, Encoding a Gαo Subunit of Heterotrimeric G Proteins, Cause Epileptic Encephalopathy. (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakamura, K., et al.,
  • 雑誌名: Am. J. Hum. Genet. 巻: 93 号: 3 ページ: 496-505
  • DOI: 10.1016/j.ajhg.2013.07.014
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cl- homeodynamics in gap-junction-coupled astrocytic networks on activation of GABAergic synapses. (2013)
  • 著者名/発表者名: Egawa K., Yamada J., Furukawa T., Yanagawa Y., Fukuda A
  • 雑誌名: The Journal of physiology 巻: 591 号: 16 ページ: 3901-3917
  • DOI: 10.1113/jphysiol.2013.257162
  • 査読あり
• [雑誌論文] Modulation of allopregnanolone on excitatory transmitters release from single glutamatergic terminal (2013)
  • 著者名/発表者名: Iwata, S., Wakita, M., Shin, M., Fukuda, A. and Akaike, N.
  • 雑誌名: Brain Research Bulletin 巻: 93 ページ: 39-46
  • DOI: 10.1016/j.brainresbull.2012.11.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pathophysiological power of improper tonic GABAA conductances in mature and immature models. (2013)
  • 著者名/発表者名: Egawa, K. and Fukuda, A.
  • 雑誌名: Frontiers in Neural Circuits 巻: 7 ページ: 170-170
  • DOI: 10.3389/fncir.2013.00170
  • 査読あり
• [雑誌論文] A perturbation of multimodal GABA functions underlying the formation of focal cortical malformations : assessments by using animal models (2013)
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A. and Wang, T.
  • 雑誌名: Neuropathology 巻: 33 号: 4 ページ: 480-486
  • DOI: 10.1111/neup.12021
  • 査読あり
• [雑誌論文] アンジェルマン症候群の運動障害と小脳での持続性抑制の低下. (2013)
  • 著者名/発表者名: 江川 潔、福田敦夫.
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 31 ページ: 914-917
• [雑誌論文] Pre- and post-synaptic switches of GABA actions associated with Cl - homeostatic changes are induced in the spinal nucleus of the trigeminal nerve in a rat model of trigeminal neuropathic pain. (2012)
  • 著者名/発表者名: Wei, B., et al,
  • 雑誌名: Neuroscience 巻: 228 ページ: 334-348
  • DOI: 10.1016/j.neuroscience.2012.10.043
  • 査読あり
• [学会発表] Aberrant oscillation property of Perkinje cells is caused by decreased tonic inhibitionin granule in granule cells in mice model of Angelman syndrome. (2016)
  • 著者名/発表者名: Egawa, K. and Fukuda, A.
  • 学会等名: 第93回日本生理学会大会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（北海道・札幌市）
  • 年月日: 2016-03-23
• [学会発表] De novo Kv2.1 mutants causing infantile generalized seizures and psychomotor developmental delay inhibit repetitive neuronal firing. (2016)
  • 著者名/発表者名: Akita, T., Saitsu, H., Matsumoto, N. and Fukuda, A.
  • 学会等名: 第93回日本生理学会大会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター（北海道・札幌市）
  • 年月日: 2016-03-23
• [学会発表] 発生期マウス大脳皮質においてGABAA受容体と母体由来タウリンは神経前駆細胞の時系列的性質変化を制御する. (2016)
  • 著者名/発表者名: 栃谷史郎, 古川智範, 伊藤崇志, 松島芳隆, 小島俊男, 松崎秀夫, 福田敦夫.
  • 学会等名: 第2回国際タウリン研究会日本部会
  • 発表場所: アオッサ福井（福井県福井市）
  • 年月日: 2016-03-05
• [学会発表] Taurine is involved in the temporal regulation of the properties of neural progenitors in the mouse developing cortex. (2015)
  • 著者名/発表者名: 栃谷史郎, 古川智範, 伊藤崇志, 小島俊男, 松崎秀夫, 福田敦夫.
  • 学会等名: 第38回日本分子生物学会年会・第88回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-12-02
• [学会発表] CRH放出機構における新規GABA作用の発見. (2015)
  • 著者名/発表者名: 福田敦夫, 柿沢圭亮, 渡部美穂, 大川雄太, 大石敏弘, 山下美保, 柳川右千夫, 沖隆.
  • 学会等名: 第42回日本脳科学会
  • 発表場所: ＡＮＡホリデイ・イン リゾート宮崎（宮崎県・宮崎市）
  • 年月日: 2015-11-12
• [学会発表] 出生前ストレス曝露による生後大脳皮質におけるGABA細胞とペリニューラルネットの減少. (2015)
  • 著者名/発表者名: 福田敦夫.
  • 学会等名: 第13回糖鎖科学コンソーシアムシンポジウム
  • 発表場所: ウインクあいち（愛知県・名古屋市）
  • 年月日: 2015-10-20
  • 招待講演
• [学会発表] Dual effects of serotoninergic inputs on the local circuits regulating the corticotropin-releasing factor neurons in the paraventricular nucleus of the hypothalamus: an electrophysiological study using the CRF-VenusΔNeo mouse. (2015)
  • 著者名/発表者名: Sato, T., Sugiya, T., Fuse, T., Uchida, K., Sugimoto, N., Abe, M., Yamazaki, M., Fukuda, A., Sakimura, K. and Itoi, K.
  • 学会等名: Society for Neuroscience 2015
  • 発表場所: Chicago(USA)
  • 年月日: 2015-10-19
  • 国際学会
• [学会発表] CRHニューロン制御におけるGABAの新たな役割についての検討. (2015)
  • 著者名/発表者名: 柿沢圭亮，渡部美穂，大川雄太，大石敏弘，山下美保，柳川右千夫，沖 隆，福田敦夫.
  • 学会等名: 第42回日本神経内分泌学会・第23回日本行動神経内分泌研究会・合同学術集会
  • 発表場所: 仙台市戦災復興記念館（宮城県・仙台市）
  • 年月日: 2015-09-19
• [学会発表] Taurine concentration and distribution in brain of frontaltemporal lobar degeneration patients. (2015)
  • 著者名/発表者名: Matsushita, S., Masaki, N, Kondo, T., Takei, S., Akatsu, H., Akita, T., Sugiyama, E., Fukuda, A., Yao, I. and Setou, M.
  • 学会等名: 第40回日本医用マススペクトル学会年会
  • 発表場所: アクトシティ浜松（静岡県・浜松市）
  • 年月日: 2015-09-17
• [学会発表] Visualization of the glutamate release in the plexiform layers of the mouse retina. (2015)
  • 著者名/発表者名: Ohkuma, M., Horio, K., Kaneda, M., Yoshida, S., Fukuda, A. and Miyachi, E.
  • 学会等名: 第38回日本神経科学大会
  • 発表場所: 神戸国際会議場・展示場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-07-30
• [学会発表] Persistent reduction of MHC class I in dopamine neurons contributes to robust cocaine-seeking behavior. (2015)
  • 著者名/発表者名: Murakami, G., Fukuda, A., Iwashita, T. and Nakahara, D.
  • 学会等名: 第38回日本神経科学大会
  • 発表場所: 神戸国際会議場・展示場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-07-29
• [学会発表] A novel role of GABA in the release of CRH in the hypothalamo-pituitary pathway. (2015)
  • 著者名/発表者名: Kakizawa, K., Watanabe, M., Yanagawa, Y., Oki, Y. and Fukuda, A.
  • 学会等名: 第38回日本神経科学大会
  • 発表場所: 神戸国際会議場・展示場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-07-28
• [学会発表] Prenatal stress-induced selective deterioration of neurogenesis of parvalbuminpositive GABAergic neurons. (2015)
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A.
  • 学会等名: 第92回日本生理学会大会
  • 発表場所: 神戸国際会議場・展示場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-03-23
• [学会発表] Functional regulation of neuronal K+-Cl−cotransporter KCC2. (2015)
  • 著者名/発表者名: Watanabe, M., Iwata, S., Furukawa, T., Kumada, T., Uchida, T., Hirose, S. and Fukuda, A.
  • 学会等名: 第92回日本生理学会大会
  • 発表場所: 神戸国際会議場・展示場（兵庫県・神戸市）
  • 年月日: 2015-03-23
• [学会発表] Maternal taurine modulate fetal brain development by affecting Cl-homeostasis and GABAA receptors. (2015)
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A.
  • 学会等名: The 12th Korea-Japan Joint Symposium of Brain Sciences, and Cardiac and Smooth Muscle Sciences
  • 発表場所: Yongin(Korea)
  • 年月日: 2015-01-23
• [学会発表] 母体由来タウリンが胎仔脳の形成とその特異性に与える影響 (2014)
  • 著者名/発表者名: 古川智範, 福田敦夫.
  • 学会等名: 第41回日本脳科学会
  • 発表場所: 福井県県民ホール（福井県・福井市）
  • 年月日: 2014-11-22
• [学会発表] Alterlations in extracellular sugar chain in prenatally stressed mouse brain. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A. and Wang, T.
  • 学会等名: SFG & JSCR 2014 Joint Annual Meeting
  • 発表場所: Honolulu (USA)
  • 年月日: 2014-11-16
• [学会発表] GAD67-GFP knockinマウスを用いた CRH ニューロン制御における GABA の役割についての検討 (2014)
  • 著者名/発表者名: 柿沢圭亮, 渡部美穂, 柳川右千夫, 沖隆, 福田敦夫.
  • 学会等名: 第61回中部日本生理学会
  • 発表場所: 名古屋市立大学（愛知県・名古屋市）
  • 年月日: 2014-11-07
• [学会発表] 発達期のマルチモーダルなGABA受容体作用から麻酔薬毒性を考察する (2014)
  • 著者名/発表者名: 福田敦夫
  • 学会等名: 第34回日本臨牀麻酔学会
  • 発表場所: グランドプリンスホテル新高輪国際館パミール（東京都・港区）
  • 年月日: 2014-11-03
• [学会発表] GAD67-GFP ノックインマウスを用いた CRH ニューロン制御における GABA の役割についての検討. (2014)
  • 著者名/発表者名: 柿沢圭亮, 渡部美穂, 大川雄太, 大石敏弘, 山下美保, 柳川右千夫, 沖隆, 福田敦夫.
  • 学会等名: 第41回日本神経内分泌学会学術集会
  • 発表場所: 都道府県会館（東京都・千代田区）
  • 年月日: 2014-11-01
• [学会発表] Maternally-derived ambient taurine plays a pivotal role in radial migration in the embryonic mouse neocortex by tonically activating GABAA receptors. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A., Furukawa, T., Yamada, J., Akita, T., Matsushima, Y., Yanagawa, Y.
  • 学会等名: 第37回日本神経科学大会
  • 発表場所: パシフィコ横浜（神奈川県・横浜市）
  • 年月日: 2014-09-12
• [学会発表] Maternal taurine modulates immature aspect of GABA actions involved in epileptogenesis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A.
  • 学会等名: The 16th Annual Meeting of Infantile Seizure Society (ISS): International Symposium on Epileptic Syndromes of Early Infancy and Childhood (ISES)
  • 発表場所: Cappadocia, (Turkey)
  • 年月日: 2014-06-23
  • 招待講演
• [学会発表] Visualization of the glutamate release in the mouse retina. (2014)
  • 著者名/発表者名: Mahito Ohkuma, Kayo Horio, Makoto Kaneda, Sachiko Yoshida, Atsuo Fukuda, Ei-ichi Miyachi.
  • 学会等名: 第91回日本生理学会大会
  • 発表場所: 鹿児島
• [学会発表] Cl- homeodynamics in astrocytic networks on activation of tripartite GABAergic synapses. (2013)
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A., Egawa, K., Yamada, J., Furukawa, T. and Yanagawa, Y.
  • 学会等名: Society for Neuroscience 2013
  • 発表場所: San Diego, USA
• [学会発表] 母体ストレスとGABA合成酵素減少による仔脳の病的所見 GAD67遺伝子ヘテロ欠損仔への母体ストレスが生後脳のPV陽性GABA細胞を特異的に減少させる. (2013)
  • 著者名/発表者名: 内田 琢, 古川智範, 岩田暁美, 柳川右千夫, 福田敦夫.
  • 学会等名: 日本赤ちゃん学会第13回学術集会
  • 発表場所: 福岡
• [学会発表] Developmental changes in the respiration-related rhythmic activity in mouse hypoglossal nucleus. (2013)
  • 著者名/発表者名: 岡部明仁, 荒田晶子, 清水-岡部千草, 小西史朗, 福田敦夫, 高山千利.
  • 学会等名: 第36回日本神経科学大会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] Taurine is involved in the regulation of the intrinsic properties of the neural progenitors as a possible ligand of GABAA receptors in the mouse developing neocortex. (2013)
  • 著者名/発表者名: 栃谷史郎, 古川智範, 福田敦夫.
  • 学会等名: 第36回日本神経科学大会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] Modulation of excitatory action of GABA in GnRH neurons in vivo cause impairment of fertility. (2013)
  • 著者名/発表者名: 渡部美穂、鍋倉淳一、福田敦夫.
  • 学会等名: 第36回日本神経科学大会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] Activity dependent release of taurine facilitates the excitatory neurotransmission in the marginal zone of developing cerebral cortex. (2013)
  • 著者名/発表者名: 熊田竜郎, 千 太哲, 中村直人, 古川智範, 山田順子, 秋田天平, Welner Kilb, Heiko, J. Luhmann, 中原大一郎, 福田敦夫.
  • 学会等名: 第36回日本神経科学大会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] Valproate application to rat fetus changes developing GABA release and neuronal differentiation. (2013)
  • 著者名/発表者名: 吉田祥子, 田野崎真, 福田敦夫, 笛田由紀子, 関野祐子.
  • 学会等名: 第36回日本神経科学大会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] Maternal taurine as a modulator of fetal brain’s Cl- homeostasis.
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A.
  • 学会等名: 93rd DPG Annual Meeting
  • 発表場所: Mainz, Germany
  • 招待講演
• [学会発表] Diminished tonic GABAA inhibition attributable to decreased GAT1 degradation in cerebellar granule cells in a model of Angelman syndrome (Ube3am-/p+ mice).
  • 著者名/発表者名: 福田敦夫, 江川 潔.
  • 学会等名: 第36回日本神経科学大会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] Developmental Cl- homeodynamics underlying neonatal seizures.
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A.
  • 学会等名: Pediatric Academic Societies (PAS) Annual Meeting
  • 発表場所: Washington DC, USA
  • 招待講演
• [学会発表] Maternal taurine as a modulator of GABAA receptor and Cl- homeostasis during perinatal period.
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A.
  • 学会等名: The 15th International Symposium on Neonatal Seizures and Related Disorders (ISNS)
  • 発表場所: 東京
  • 招待講演
• [図書] GABAとその受容体, 臨床てんかん学 (2015)
  • 著者名/発表者名: 福田敦夫
  • 総ページ数: 671
  • 出版者: 医学書院
• [図書] Chloride homeodynamics underlying pathogenic modal shifts of GABA actions. Chapter 46. Cellular Migration and Formation of Neuronal Connections (2013)
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A.
  • 総ページ数: 1080
  • 出版者: Academic Press
• [図書] Multimodal GABAA receptor functions on cell development. Chapter 50. Cellular Migration and Formation of Neuronal Connections (2013)
  • 著者名/発表者名: Fukuda, A. Nakanishi, Y., Kumada, T. and Furukawa, T.
  • 総ページ数: 1080
  • 出版者: Academic Press
• [備考] 浜松医科大学医学部神経生理学講座ホームページ
  • URL: http://www.hama-med.ac.jp/uni_education_igakubu_igaku_seiri1.html
• [備考] 浜松医科大学神経生理学講座
  • URL: http://www.hama-med.ac.jp/uni_education_igakubu_igaku_seiri1.html