アルツハイマー病に関与するカルパインの生体内基質・阻害剤の探索と動態解析

• 研究課題/領域番号: 25350917
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 応用健康科学
• 研究機関: 国立研究開発法人理化学研究所
• 研究代表者: 津吹 聡 国立研究開発法人理化学研究所, 脳科学総合研究センター, 専門職研究員 (20217368)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2015年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円); 2014年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2013年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
• キーワード: アルツハイマー病 / カルパイン / カルパスタチン / 二次元電気泳動 / タンパク質同定 / 質量分析 / 遺伝子改変マウス / 初代培養細胞 / 等電点電気泳動

研究成果の概要

アルツハイマー病の発症に関与しているカルパインを異常活性化させたカルパスタチン遺伝子欠損マウスと野生型マウスの海馬の初代培養細胞を使用して、カルパインの生体内基質の同定を試みた。回収した細胞抽出液を4つの画分に分画後、蛍光二次元電気泳動法により解析した。またカルパイン結合カラムを作製し、4つの画分を添加し、吸着したタンパク質を電気泳動後、銀染色したタンパク質スポットをゲルから切り出し、酵素消化後、質量分析によりタンパク質同定を行った。さらに同定したカルパインの生体内基質の可能性があるタンパク質の特異的抗体を使用してウェスタンブロッティングを行い、動態を解析した。