動物接種とゲノム解析の組み合わせによる画期的な難同定病原微生物診断法の開発

• 研究課題/領域番号: 25460692
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 宮崎大学
• 研究代表者: 岡山 昭彦 宮崎大学, 医学部, 教授 (70204047)
• 研究分担者: 高城 一郎 宮崎大学, 医学部, 講師 (20418841) ; 林 哲也 九州大学, 医学研究院, 教授 (10173014) ; 越本 知大 宮崎大学, フロンティア実験総合センター, 教授 (70295210)
• 研究期間 (年度): 2013-04-01 – 2016-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2015年度)
• 配分額: 5,200千円 (直接経費: 4,000千円、間接経費: 1,200千円); 2015年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2014年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2013年度: 2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円)
• キーワード: 感染症 / 新規診断法 / レーザーマイクロダイセクション / レーザーマイクロダイセクション法

研究成果の概要

培養困難な感染症の診断法開発をめざして、グラム染色、培養法に加えて菌体成分をスライド標本からレーザーマイクロダイセクション (LMD) 法を用いて細菌あるいは真菌の16sリボゾーマルRNA(16SrRNA)遺伝子を増幅することを試みたところ、大腸菌約100菌体までは安定して検出することはできた。しかしながらPCR効率を上げるとコンタミネーションが見られたため、方法の見直しに加え、病原微生物特異的PCRも試みた。後者では、大腸菌では、特異PCRが16SrRNA遺伝子増幅よりも感度が高く有望と思われた。今後、動物実験を経て方法を改善し、ヒト臨床サンプルからの検出に取り組みたい。

研究成果

• [雑誌論文] 質量分析装置（MALDIバイオタイパー）を用いた酵母様真菌同定におけるサンプル調整法の基礎的検討. (2014)
  • 著者名/発表者名: 加来恵, 山田明輝, 武田展幸, 佐伯裕二, 梅木一美, 山本成郎, 岡山昭彦.
  • 雑誌名: 日本臨床化学会九州支部会誌 巻: 63 ページ: 9-15
• [雑誌論文] Rapid identification and subtyping of Helicobacter cinaedi strains by intact-cell mass spectrometry profiling with the use of matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. (2014)
  • 著者名/発表者名: Taniguchi, T., Sekiya, A., Higa, M., Saeki, Y., Umeki, K., Okayama, A., Hayashi, T., Misawa, N.
  • 雑誌名: J. Clin. Microbiol. 巻: 52 号: 1 ページ: 95-102
  • DOI: 10.1128/jcm.01798-13
  • 査読あり
• [学会発表] レーザーマイクロダイセクション法（LMD）を用いた細菌の検出と同定の試み (2016)
  • 著者名/発表者名: 山田明輝,加来恵, 武田展幸, 佐伯裕二,（学会員外共同研究者：梅木一美,山本成郎, 岡山昭彦）
  • 学会等名: 第27回日本臨床微生物学会総会・学術集会
  • 発表場所: 仙台市
  • 年月日: 2016-01-29
• [学会発表] シンポジウム2. 感染制御と微生物検査.多岐にわたる働きかけが必要とされる感染対策の現状. (2014)
  • 著者名/発表者名: 岡山昭彦.
  • 学会等名: 日本臨床検査医学会学術集会(第61回)
  • 発表場所: 福岡市
  • 年月日: 2014-11-24
• [学会発表] 質量分析装置を用いた糸状菌同定検査の有用性について. (2014)
  • 著者名/発表者名: 山田明輝, 加来恵, 弓削めぐみ, 武田展幸, 佐伯裕二, 梅木一美, 山本成郎, 岡山昭彦.
  • 学会等名: 日臨技九州支部医学検査学会(第49回)
  • 発表場所: 沖縄県宜野湾市
  • 年月日: 2014-11-02
• [学会発表] プロカルシトニン定量値別の抗菌薬使用や血液培養施行率の検討.
  • 著者名/発表者名: 高城一郎, 橋倉悠輝, 山本成郎, 梅木一美, 岡山昭彦.
  • 学会等名: 第60回日本臨床検査医学会学術集会.
  • 発表場所: 神戸市国際会議場（神戸市）