魚類の細胞内LPSセンサーの探査およびその認識機構の解明

• 研究課題/領域番号: 26450288
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 水圏生命科学
• 研究機関: 宮崎大学
• 研究代表者: 引間 順一 宮崎大学, 農学部, 准教授 (70708130)
• 研究期間 (年度): 2014-04-01 – 2017-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2016年度)
• 配分額: 5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円); 2016年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2015年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2014年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
• キーワード: トラフグ / NLR / カスパーセ１ / インフラマソーム / メダカ / LPS / NLRファミリー遺伝子 / 炎症反応 / 炎症性サイトカイン遺伝子 / パターン認識 / 魚類 / NOD様受容体（NLR）

研究成果の概要

魚類における初めての細胞内LPS認識センサーの発見を目的として、魚類細胞内における細胞内寄生性細菌LPS認識機構に関与するインフラマソーム関連遺伝子の同定およびその認識機構を解明することを計画した。トラフグのインフラマソーム関連遺伝子をクローン化した。トラフグの腎臓細胞ではLPS、ナイジェリシン、シリカ結晶およびアラムの刺激によって炎症性サイトカイン遺伝子の発現が強く誘導されることから、これらの誘導に何らかの形でインフラマソームが関与していると推察された。また、メダカにおいて、PYDドメインをもつNLR遺伝子、およびCaspase-1遺伝子をクローン化し、Caspase-1の活性を確認した。

研究成果

• [雑誌論文] Complete Genome Sequence of Photobacterium damselae subsp. piscicida Strain OT-51443 Isolated from Yellowtail (Seriola quinqueradiata) in Japan (2017)
  • 著者名/発表者名: Aoki T, Teru Y, Kono T, Sakai M , Takano T, Hawke JP, Fukuda Y, Takeyama H, Hikima J
  • 雑誌名: Genome Announcements 巻: 印刷中
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Direct Detection of Astaxanthin from Salmon Filet Using Raman Spectroscopy (2017)
  • 著者名/発表者名: Hikima J, Ando M, Hamaguchi H, Sakai M, Maita M, Yazawa K, Takeyama H, Aoki T
  • 雑誌名: Marine Biotechnology 巻: 19 号: 2 ページ: 157-163
  • DOI: 10.1007/s10126-017-9739-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Molecular Characterization and Expression Analysis of Tumor Necrosis Factor Alpha-induced Protein 3 (TNFAIP3/A20) Gene from Japanese Pufferfish <i>Takifugu rubripes</i> (2017)
  • 著者名/発表者名: Hikima J, Morita M, Kinoshita S, Basu M, Biswas G, Kono T, Sakai M
  • 雑誌名: 魚病研究 巻: 52 号: 1 ページ: 15-22
  • DOI: 10.3147/jsfp.52.15
  • NAID: 130005548817
  • ISSN: 0388-788X, 1881-7335
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Characterization of a specific monoclonal antibody against immunoglobulin light kappa/L1 chain in olive flounder (Paralichthys olivaceus) (2017)
  • 著者名/発表者名: Kim YK, Lee JS, Jung JW, Hikima J, Ohtani M, Jang HB, Nho SW, Cha IS, Park SB, Lee JH, Aoki T, Jung TS
  • 雑誌名: Fish and Shellfish Immunology 巻: 60 ページ: 88-96
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2016.11.023
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Detection of Kudoa septempunctata in the Japanese Flounder by Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) Targeting the Internal Transcribed Spacer (ITS) Regions (2016)
  • 著者名/発表者名: Biswas G, Kodama H, Mekata T, Kono T, Yokoyama H, Sakai M, Hikima J
  • 雑誌名: Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences 巻: 16 号: 3 ページ: 623-628
  • DOI: 10.4194/1303-2712-v16_3_15
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Inflammatory immune response by lipopolysaccharide-responsive nucleotide binding oligomerization domain (NOD)-like receptors in the Japanese pufferfish (Takifugu rubripes). (2016)
  • 著者名/発表者名: Biswas G, Bilen S, Kono T, Sakai M, Hikima J
  • 雑誌名: Developmental and Comparative Immunology 巻: 55 ページ: 21-31
  • DOI: 10.1016/j.dci.2015.10.008
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Expression and biological activity of two types of interferon genes in medaka (Oryzias latipes). (2016)
  • 著者名/発表者名: Maekawa S, Chiang YA, Hikima J, Sakai M, Lo CF, Wang HC, Aoki T
  • 雑誌名: Fish and Shellfish Immunology 巻: 48 ページ: 20-29
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2015.11.036
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Immune responses in the Japanese pufferfish (Takifugu rubripes) head kidney cells stimulated with particulate silica. (2016)
  • 著者名/発表者名: Morimoto T, Biswas G, Kono T, Sakai M, Hikima J
  • 雑誌名: Fish and Shellfish Immunology 巻: 49 ページ: 84-90
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2015.12.023
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] Inductive immune responses in the Japanese pufferfish (Takifugu rubripes) treated with recombinant IFN-γ, IFN-γrel, IL-4/13A and IL-4/13B (2016)
  • 著者名/発表者名: Gouranga Biswas, Ryusuke Nagamine, Jun-ichi Hikima, Masahiro Sakai, Tomoya Kono
  • 雑誌名: International Immunopharmacology 巻: 31 ページ: 50-56
  • DOI: 10.1016/j.intimp.2015.12.005
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著 / 謝辞記載あり
• [雑誌論文] SPFクルマエビにおける高感度選抜法の開発．養殖技術講座&#8212;SPFクルマエビ種苗－第１回． (2016)
  • 著者名/発表者名: 引間順一・浜野かおる
  • 雑誌名: 月刊養殖ビジネス 巻: 1 ページ: 19-22
• [雑誌論文] Draft Genome Sequence of the Fish Pathogen Mycobacterium pseudoshottsii Strain JCM15466, a Species Closely Related to M. marinum. (2016)
  • 著者名/発表者名: Hikima J, Sakai M, Aoki T, Takeyama H, Hawke J, Mori K, Tashiro K, Kuhara S.
  • 雑誌名: Genome Announcements 巻: 4 号: 1
  • DOI: 10.1128/genomea.01630-15
  • オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Detection of <i>Kudoa amamiensis</i> Using Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) (2015)
  • 著者名/発表者名: Sakai M, Biswas G, Kono T, Hikima J, Yokoyama H.
  • 雑誌名: 魚病研究 巻: 50 号: 3 ページ: 119-122
  • DOI: 10.3147/jsfp.50.119
  • NAID: 130005100742
  • ISSN: 0388-788X, 1881-7335
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] DNA vaccine-mediated innate immune response triggered by PRRs in teleosts (2015)
  • 著者名/発表者名: Aoki T, Takano T, Hikima J
  • 雑誌名: Fisheries Science 巻: 81 号: 2 ページ: 205-217
  • DOI: 10.1007/s12562-014-0845-4
  • NAID: 40020416307
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] The cytosolic sensor, DDX41, activates antiviral and inflammatory immunity in response to stimulation with double-stranded DNA adherent cells of the olive flounder, Paralichthys olivaceus. (2015)
  • 著者名/発表者名: Quynh NT, Hikima J, Kim YR, Fagutao FF, Jung TS, Aoki T
  • 雑誌名: Fish and Shellfish Immunology 巻: 44 号: 2 ページ: 576-583
  • DOI: 10.1016/j.fsi.2015.03.008
  • 査読あり
• [雑誌論文] Infalammatory responses in the Japanese pufferfish (Takifugu rubripes) head kidney cells stimulated with an inflammasome-inducing agenet, nigericin (2014)
  • 著者名/発表者名: S. Bilen, G. Biswas, S. Otsuyama, T. Kono, M. Sakai and J. Hikima
  • 雑誌名: Developmental and Comparative Immunology 巻: 46 号: 2 ページ: 222-230
  • DOI: 10.1016/j.dci.2014.04.010
  • 査読あり
• [学会発表] メダカ腸管におけるIL-17の役割を明らかにするためのIL-17A/F1変異体のトランスクリプトーム解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 引間順一、池田大介、和泉幹久、森本和月、河野智哉、酒井正博、竹山春子、青木 宙、水澤奈々美、渡部終五、木下政人
  • 学会等名: 平成２８年度日本水産学会春季大会
  • 発表場所: 東京海洋大学（東京、品川）
  • 年月日: 2017-03-26
  • 国際学会
• [学会発表] A Molecular Adjuvant Based on the Pattern Recognition System Using Toll-Like Receptor 5 and Bacterial Flagellin Genes in Teleost Fish (2016)
  • 著者名/発表者名: Natsuki Morimoto, Tomoya Kono, Masakazu Kondo, Masahiro Sakai, Jun-ichi Hikima
  • 学会等名: The 10th IMT-GT UNINET Conference 2016
  • 発表場所: Prince of Songkla University (Hat Yai, Thailand)
  • 年月日: 2016-12-01
  • 国際学会
• [学会発表] Establishment of ASC-knockout medaka using CRISPR/Cas system (2016)
  • 著者名/発表者名: Nastuki Morimoto, Shun Maekawa, Han-Ching Wang, Takashi Aoki, Kono Tomoya, Masaniro Sakai, Jun-ichi Hikima
  • 学会等名: he 22nd Japanese Medaka and Zebrafish Meeting (NBRP Medaka and Zebrafish Joint International Meeting)
  • 発表場所: NBRP (Okazaki, Aichi)
  • 年月日: 2016-08-20
  • 国際学会
• [学会発表] Cytosolic CpGs induce DHX9 and DHX36 pathway mediated through MyD88 in teleosts (2016)
  • 著者名/発表者名: Jun-ichi Hikima, Koji Ebisu, Tomoya Kono, Masahiro Sakai
  • 学会等名: The 7th World Fisheries Congress in Busan
  • 発表場所: Busan Bexco (Busan, Korea)
  • 年月日: 2016-05-23
  • 国際学会
• [学会発表] ラマン分光法によるマグロ筋肉に含まれる多価不飽和脂肪酸の検出の試み (2016)
  • 著者名/発表者名: 引間順一・安藤正浩・仲西友紀・河原 聡・酒井正博・濵口宏夫・竹山春子・青木 宙
  • 学会等名: 平成２８年度日本水産学会春季大会
  • 発表場所: 東京海洋大学（東京、品川）
  • 年月日: 2016-03-26
• [学会発表] 遺伝子診断技術を用いた簡便なエビ種判別法の確立 (2016)
  • 著者名/発表者名: 西 純市、岩崎直子、阪地英男、引間順一、酒井正博
  • 学会等名: 平成２８年度日本水産学会春季大会
  • 発表場所: 東京海洋大学（東京、品川）
  • 年月日: 2016-03-26
• [学会発表] 空気暴露ストレス負荷によるストレス応答遺伝子の発現パターンを利用したウイルスキャリアー親エビの選抜 (2016)
  • 著者名/発表者名: 酒井正博・児玉ひろの・引間順一・河野智哉・伊丹利明
  • 学会等名: 平成２８年度日本魚病学会春季大会
  • 発表場所: 日本獣医生命科学大学（東京、武蔵野）
  • 年月日: 2016-03-12
• [学会発表] アラムを接種したトラフグにおけるサイトカイン遺伝子およびインフラマソーム関連遺伝子の発現動態 (2016)
  • 著者名/発表者名: 河野智哉・森本隆志・酒井正博・引間順一
  • 学会等名: 平成２８年度日本魚病学会春季大会
  • 発表場所: 日本獣医生命科学大学（東京、武蔵野）
  • 年月日: 2016-03-12
• [学会発表] 16SrRNA-based metagenomics analysis of microorganisms from cultured tilapia ponds in Thailand (2016)
  • 著者名/発表者名: Aoki T, Watanabe U, Takeyama H, Hattori M, Suda W, Hikima J, Sakai M, Unajak S, Rapeepat M
  • 学会等名: HNRCT-JSPS Asian Core Program Symposium 2016
  • 発表場所: Kasetsart University (Bangkok, Thailand)
  • 年月日: 2016-02-12
  • 国際学会
• [学会発表] Cytosolic pattern recognition system in fish (2016)
  • 著者名/発表者名: Jun-ichi Hikima
  • 学会等名: The Third Symposium for Different Field Exchange by Tenure Track Researchers in Tokyo University of Marine Science and Technology
  • 発表場所: Tokyo University of Marine Science and Technology (Shinagawa, Tokyo)
  • 国際学会 / 招待講演
• [学会発表] トラフグにおける粒子状結晶化物質の刺激に対する免疫応答 (2015)
  • 著者名/発表者名: 森本隆志・河野智哉・酒井正博・引間順一
  • 学会等名: 平成27年度日本水産学会九州支部大会
  • 発表場所: 宮崎大学（宮崎）
  • 年月日: 2015-11-07
• [学会発表] 2種類のメダカI型インターフェロンによって誘導される免疫応答 (2015)
  • 著者名/発表者名: 前川 峻・青木 宙・王 涵青・羅 竹芳・竹山春子・引間順一・酒井正博
  • 学会等名: 平成２７年度日本魚病学会秋季大会
  • 発表場所: 東京大学（東京、文京）
  • 年月日: 2015-09-25
• [学会発表] クルマエビにおけるストレス応答遺伝子の発現動態~特に低酸素負荷に対する応答~ (2015)
  • 著者名/発表者名: 児玉ひろの・引間順一・河野智哉・稲田真理・伊丹利明・酒井正博
  • 学会等名: 平成２７年度日本魚病学会秋季大会
  • 発表場所: 東京大学（東京、文京）
  • 年月日: 2015-09-25
• [学会発表] 水産無脊椎動物であるエビ類・貝類のIL-6ホモログに関する研究 (2015)
  • 著者名/発表者名: 稲田真理・米加田徹・引間順一・酒井正博・伊丹利明
  • 学会等名: 平成２７年度日本魚病学会秋季大会
  • 発表場所: 東京大学（東京、文京）
  • 年月日: 2015-09-25
• [学会発表] トラフグ頭腎細胞におけるDAMPs刺激に対する免疫応答 (2015)
  • 著者名/発表者名: 引間順一・森本隆志・河野智哉・酒井正博
  • 学会等名: 平成２７年度日本水産学会秋季大会
  • 発表場所: 東北大学（宮城、仙台）
  • 年月日: 2015-09-22
• [学会発表] METAGENOMIC ANALYSES OF BACTERIAL FLORA IN THE POND WATER AND INTESTINE OF TILAPIA IN THAILAND (2015)
  • 著者名/発表者名: T. Aoki, U. Watanabe, H. Takeyama, W. Suda, S. Hattori, J. Hikima, M. Sakai, S. Unajak, M. Rapeepat, HC Wang, CF Lo
  • 学会等名: 17th International Conference on Diseases of Fish and Shellfish (EAFP conference)
  • 発表場所: Las Palmas de Grand Canaria, Spain
  • 年月日: 2015-09-07
  • 国際学会
• [学会発表] メダカⅠ型インターフェロン遺伝子の同定と生物活性 (2015)
  • 著者名/発表者名: 前川 峻，青木 宙，王 涵青，羅 竹芳，竹山 春子，引間 順一，酒井 正博
  • 学会等名: 第27回日本比較免疫学会学術集会
  • 発表場所: 福井県立大学（福井、小浜
  • 年月日: 2015-08-21
• [学会発表] Immune responses in the Japanese pufferfish (Takifugu rubripes) head kidney cells stimulated with particulate silica (2015)
  • 著者名/発表者名: Masahiro Sakai, Takashi Morimoto, Gouranga Biswas, Tomoya Kono, Jun-ichi Hikima
  • 学会等名: 13th International Society of Developmental & Comparative Immunology
  • 発表場所: Murcia, Spain
  • 年月日: 2015-06-28
  • 国際学会
• [学会発表] Involvement of an intracellular pattern recognition receptor, NOD-like receptor in inflammatory response of the Japanese pufferfish (Takifugu rubripes) (2015)
  • 著者名/発表者名: Jun-ichi Hikima, Gouranga Biswas, Tomoya Kono, Masahiro Sakai
  • 学会等名: 13th International Society of Developmental & Comparative Immunology
  • 発表場所: Murcia, Spain
  • 年月日: 2015-06-28
  • 国際学会
• [学会発表] Expression and biological activity of two types of interferon genes in medaka fish (Oryzias latipes) (2015)
  • 著者名/発表者名: Shun Maekawa, Takashi Aoki, Han-Ching Wang, Yi-An Chiang, Chu-Fang Lo, Haruko Takeyama, Jun-Ichi Hikima, Masahiro Sakai
  • 学会等名: 13th International Society of Developmental & Comparative Immunology
  • 発表場所: Murcia, Spain
  • 年月日: 2015-06-28
  • 国際学会
• [学会発表] フグA20遺伝子の全長クローニングおよび発現解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 酒井正博、森田美咲、森本隆司、河野智哉、引間順一
  • 学会等名: 第17回マリンバイオテクノロジー学会
  • 発表場所: 東京海洋大学（東京、品川）
  • 年月日: 2015-05-30
• [学会発表] フグDHX9および36遺伝子のクローン化およびCpGによる遺伝子発現誘導 (2015)
  • 著者名/発表者名: 引間順一、戎 香治、林 可奈子、河野智哉、酒井正博
  • 学会等名: 第17回マリンバイオテクノロジー学会
  • 発表場所: 東京海洋大学（東京、品川）
  • 年月日: 2015-05-30
• [学会発表] リポ多糖に応答するフグNLRファミリー遺伝子の発現解析 (2015)
  • 著者名/発表者名: 引間順一、Gouranga Biswas、河野智哉、酒井正博
  • 学会等名: 平成27年度日本水産学会春季大会
  • 発表場所: 東京海洋大学（品川、東京）
  • 年月日: 2015-03-27 – 2015-03-31
• [学会発表] Immunostimulant effects of recombinant cytokine administration in the Japanese pufferfish, Takifugu rubripes (2014)
  • 著者名/発表者名: R. Nagamine, G. Biswas, J. Hikima, M. Sakai. T. Kono
  • 学会等名: Seventh International Symposium on Aquatic Animal Health
  • 発表場所: Portland, OR, USA
  • 年月日: 2014-08-31 – 2014-09-04
• [学会発表] Cytosolic sensor, DDX41 activates antiviral and inflammatory immunity in response to stimulation with dsDNA in Japanese flounder, Paralichthys olivaceus (2014)
  • 著者名/発表者名: J. Hikima, N.T Quynh, F.F. Fagutao, M. Sakai, T.S. Jung, T. Aoki
  • 学会等名: Seventh International Symposium on Aquatic Animal Health
  • 発表場所: Portland, OR, USA
  • 年月日: 2014-08-31 – 2014-09-04
• [学会発表] A new strategy to characterize different cell types from fish leukocytes using the bio-imaging technology of the confocal Raman microspectroscopy (2014)
  • 著者名/発表者名: T. Aoki, M. Ando, H. Hamaguchi, J. Hikima, M. Sakai, T. Moritomo, T. Nakanishi, H. Takeyama
  • 学会等名: Seventh International Symposium on Aquatic Animal Health
  • 発表場所: Portland, OR, USA
  • 年月日: 2014-08-31 – 2014-09-04
• [学会発表] Immunostimulant effects of the Mongolian dairy product derived lactic acid bacteria in the Japanese pufferfish (Takifugu rubripes) (2014)
  • 著者名/発表者名: G. Biswas, T. Kono, J. Hikima, M. Sakai
  • 学会等名: Seventh International Symposium on Aquatic Animal Health
  • 発表場所: Portland, OR, USA
  • 年月日: 2014-08-31 – 2014-09-04
• [学会発表] Cytokine-induced CD4 positive T cell differentiation in the Japanese pufferfish, Takifugu rubripes (2014)
  • 著者名/発表者名: T. Kono. H. Korenaga, R. Nagamine, G. Biswas, J. Hikima, M. Sakai
  • 学会等名: Seventh International Symposium on Aquatic Animal Health
  • 発表場所: Portland, OR, USA
  • 年月日: 2014-08-31 – 2014-09-04
• [学会発表] Inflammatory responses in head kidney cells stimulatied with as inflammasome inducer NIgericin in the Japanese pufferfish (Takifugu rubrepes) (2014)
  • 著者名/発表者名: J. Hikima, G. Biswas, S. Bilen, S. Otsuyama, T. Kono, M. Sakai
  • 学会等名: The 10th Asia-Pacific Marine Biotechnology Conference
  • 発表場所: Academia Sinica (Taipei, Taiwan)
  • 年月日: 2014-05-04 – 2014-05-08
• [学会発表] Involvement of an intracellular multi-protein complex, inflammasome in the inflammatory immune response of the Japanese pufferfish (Takifugu rubripes) (2014)
  • 著者名/発表者名: G. Biswas, T. Kono, M. Sakai, J. Hikima
  • 学会等名: The 10th Asia-Pacific Marine Biotechnology Conference
  • 発表場所: Academia Sinica (Taipei, Taiwan)
  • 年月日: 2014-05-04 – 2014-05-08
• [学会発表] In silico identification and expression analysis of tumor necrosis factor super family genes in the Japanese pufferfish, fugu (Takifugu rubripes) (2014)
  • 著者名/発表者名: M. Sakai, S. Kinoshita, G. Biswas, J. Hikima, T. Kono
  • 学会等名: The 10th Asia-Pacific Marine Biotechnology Conference
  • 発表場所: Academia Sinica (Taipei, Taiwan)
  • 年月日: 2014-05-04 – 2014-05-08
• [図書] Prevention And Treatment Of Diseases, Section 2.2. Diagnosis &#8211; PCR Detection. In: Fish Diseases (Ed. Takashi Aoki) (2016)
  • 著者名/発表者名: Aoki T, Hikima J
  • 出版者: Eolss Publishers/UNESCO, Co. Ltd., UK
• [図書] Fish And Shellfish Bio-Defense, Section 1. Innate Immunity In Fish. In: Fish Diseases (Ed. Takashi Aoki) (2016)
  • 著者名/発表者名: Aoki T, Hikima J
  • 出版者: Eolss Publishers/UNESCO, Co. Ltd., UK
• [図書] Diseases Caused By Bacterial Pathogens In Saltwater, Section 5. Vibriosis. In: Fish Diseases (Ed. Takashi Aoki) (2016)
  • 著者名/発表者名: Takahashi Y, Hikima J
  • 出版者: Eolss Publishers/UNESCO, Co. Ltd., UK