| 研究概要 |
細胞融合は、交配不可能な異種間の雑種作出を可能とし、育種上重要な手段である。それの雑種の同定、選抜は不可欠であるが、従来の方法は、必ずしも有効ではなかった。そこで、種特異的な塩基配列を持つrRNA遺伝子(rDNA)に着目し、簡便で能率的な方法の開発を行った。
微量の葉(100mg)から全DNAを推出した。次にDNAを適当な制限酵素で処理し、電気泳動を行い、非放射性のdigでラベルしたイネのrDNAをプロ-ブとして、サザンハイブリダイゼ-ションを行った。その結果どの雑種植物も融合親特有のバンドを併せて有することにより、体細胞雑種と同定できた。タバコの解析結果から、交配による雑種の同定も可能で、体細胞雑種はカルスの段階で同定できた。さらに木本性植物でも有効だった。このように本方法では微量のサンプルで簡単に、しかも放射制物質を用いず、DNAレベルで雑種の同定が可能である。
本方法は微量な組織からDNAを抽出し、それを解析するシステムであるから、雑種の識別のみではなく、体細胞雑種カルスの生育過程による細胞質ゲノムの動向を調べるのにも有効である。このためタバコ属雑種カルスの細胞質ゲノムを分析し次の結果を得た。1.雑種では葉緑体とミトコンドリアゲノムが異なっているcybridが比較的多くみられた。2.ミトコンドリアの遺伝子であるatpA,cob,coxIIなどをプロ-ブにして調べたところ2種のミトコンドリアDNAが組替えを起こしたhybridDNAがカルスで検出できた。3.N.langsdorffiiのミトコンドリアDNAではatpA遺伝子内で組替えが起きており、4種類のatpA遺伝子が存在する。これとN.glaucaとの雑種カルスでは両種のミトコンドリアDNAがやはりatpA遺伝子内で組替えを起こしていた。これは正常植物での組替え場所が細胞融合時でも組替え場所になることを示しており、ミトコンドリアDNAの組替えに関して新しい知見である。
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