色素性乾皮症細胞の欠損蛋白の同定とDNA除去修復機構の分子レベルでの解析

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02152021
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 榎本 武美 東京大学, 薬学部, 講師 (80107383)
• キーワード: 色素性乾皮症 / XP / C群 / DNA依存性ATPase / DNAヘリカ-ゼ

研究概要

1、ヒト細胞(HeLa)の粗抽出液をFPLC Mono Qカラムにかけ、非常に緩い塩濃度勾配で溶出することにより、粗抽出液中のDNA依存性ATPaseを5つのピ-クに分離することができた。これらのピ-クを溶出の順にQ1〜Q5と名付けた。
2、1の方法をXPのA,C,D、E、F、G群の細胞および正常細胞の抽出液に適用したところ、C群の細胞抽出液を除いて全ての細胞抽出液でQ1〜Q5のピ-クが観察された。C群の細胞抽出液では、Q1の位置のピ-クが消えQ2のピ-クが大きくなっていた。
3、HeLa細胞からDNA依存性ATPase Q1,Q2を精製した。
4、精製したQ1,Q2の性質を調べたところ、Q1は塩に抵抗性を示し、200mM Kcl存在下でも活性はKClが存在しない時と同程度であった。一方、Q2はこの条件下でほとんど活性を示さなかった。また、Q2はDNAヘリカ-ゼ(二本鎖DNA巻きもどし)活性をもっていた。
5、4でわかった性質を利用してC群で変異の観察されたピ-クを調べたところ、C群ではQ1がQ2に重って溶出されていることがわかった。
6、Q1の溶出位置のずれは、調べたC群全て(5クロ-ン)で観察された。
以上より、XPC群細胞における変異は、DNA依存性ATPase Q1に関連した蛋白の変異によることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Saijo,M.,Enomoto,T.,Hanaoka,F.,& Ui,M.: "Purification and characterization of type II topoisomerase from mouse FM3A cells:Phosphorylation of topoisomerase II and modification of its activity." Biochemistry. 29. 583-590 (1990)
• [文献書誌] Seki,M.,Enomoto,T.,Eki,T.,Miyajima,A.,Murakami,Y.,& Ui,M.: "DNA helicase and nucleosideー5'ーtriphosphatase activity of polyma virus large tumor antigen." Biochemistry. 29. 1003-1009 (1990)
• [文献書誌] Eki,T.,Enomoto,T.,Miyazawa,H.,Murakami,Y.,Hanaoka,F.,Yamada,M.,& Ui,M.: "Isolation of temperatureーsensitive cell cycle mutants from mouse FM3A cells.Characterization of mutants with special reference to DNA replication" J.Biol.Chem.265. 26-33 (1990)
• [文献書誌] Masutani,C.,Enomoto,T.,Suzuki,M.,Hanaoka,F.,Ui,M.: "DNA primase stimulating factor from mouse FM3A cells has an RNase H activity:Purification of the factor and analysis of the stimulation." J.Biol.Chem.265. 10210-10216 (1990)
• [文献書誌] TakadaーTakayama,R.,Suzuki,M.,Enomoto,T.,Hanaoka,F.,& Ui,M.: "Purification and characterization of mouse DNA polymerase α devoid of primase activity." FEBS Lett.273. 27-30 (1990)
• [文献書誌] Kudo,M.,Sugasawa,K.,Hori,T.,Enomoto,T.,Hanaoka,F.,& Ui,M.: "Human ubiqutinーactivating enzyme (El):Compensation for heatーlabile mouse El and its gene localization on the X chromosome." Exp.Cell Res.192. 110-117 (1991)