| 研究課題/領域番号 |
02454169
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 大分医科大学 |
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研究代表者 |
山本 俊輔 大分医科大学, 医学部, 教授 (90040188)
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| 研究分担者 |
瀬戸口 美保子 大分医科大学, 医学部, 助手 (20236110)
吉田 盛治 大分医科大学, 医学部, 助手 (70182764)
秋月 真一郎 大分医科大学, 医学部, 助手 (80159334)
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| 研究期間 (年度) |
1990 – 1992
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| キーワード | CD14 / MS2 / osteopontin / cDNA / genome / expression / recombinant / mouse and human |
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| 研究概要 |
1.MS2について:(1).MS2遺伝子の全塩基配列を明かにした(全長14kb、24個のエキソンと23個のイントロン)。MS2遺伝子の転写開始点を明らかにした。(2).転写開始点上流2.5kbの塩基配列を明らかにし、CATアッセイ法でMS2遺伝子のマクロファージ(Mφ)特異的発現に関与するシス配列を明らかにした。(3).MS2の細胞外部が2種類の出血性蛇毒蛋白(コラゲナーゼ活性(MTP)と血小板凝集阻止因子(PAI)型蛋白)と高い相同性をもつことを明らかにした。(4).MTPやPAIドメインおよび細胞膜外部の全構造などに対するリコンビナント(r)MS2蛋白を作成した。抗rMS2抗体を作成した。PAP法でMS2がMφおよび好中球に陽性、リンパ球および肥満細胞に陰性であること、また細胞膜に存在することを確認した。(5).ヒトMS2 cDNAを分離解析し,ヒトrMS2や抗体を作成した。2.CD14について:(1).マウスCD14遺伝子の上流3kbの塩基配列を明かにし、CD14の転写を促進する調節配列と核蛋白を同定した。(2).ヒトCD14遺伝子上流3kbの塩基配列を明らかにし、CAT解析中。(3).rCD14および抗体を作成した。PAP法でCD14がMφおよび好中球に陽性、リンパ球および肥満細胞に陰性であることや、CD14が細胞膜に存在することを確認。(4).抗CD14抗体がLPSによるφのTNFα産生およびショックを抑制することを明らかにした。3.オステオポンチン(OP)について:(1).mOP遺伝子の5 P1' P1'上流3kbを明かにした。(2).ヒトOP(hOP)遺伝子の全構造を明らかにした。(3).OP遺伝子5 P1' P1'領域に単球系細胞で特異的に転写活性を亢進させる領域が存在することを確認した。さらにヒトではこの領域に核蛋白が結合することを確認した。(3).ヒトのrOPを大腸菌系で、マウスのrOPを昆虫系で発現させ、HPLCで精製した。(4).rOPのMφおよびメラノーマ(B16-BL)細胞のハプトタキシス阻止作用をin vitroで確認した。さらに、rOPのB16-BLの肺転移阻止作用を確認した。(5).rOPに対する抗体を作成した。
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