好中球Ca^<++>依存性リン脂質結合39kDa蛋白:遺伝子発現によるその性質の解析

1990 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 02670124
• 研究機関: 高知医科大学
• 研究代表者: 内海 耕慥 高知医科大学, 医学部, 教授 (90032862)
• 研究分担者: 秋丸 國広 高知医科大学, 医学部, 教務職員 ; 枝重 圭祐 高知医科大学, 医学部, 教務職員 (30175228) ; 田中 良和 サントリー基礎研究所, 研究員
• キーワード: 好中球 / アネキシン / Ca^<++>ーリン脂質結合蛋白 / 遺伝子発現 / オカダ酸 / 形質転換

研究概要

好中球にはアネキシンタンパク質(39K)が極めて多いが、その機能についてはなお明らかでない。これを明らかにするため、アネキシンタンパク質を持たない細胞に39K cDNAを導入してその発展を試みることを企画し、次のような実験を行った。
1.上流にメタロオネイン1のプロモ-タ-を持つ39K cDNAをネオマイシン耐性遺伝子を持つプラスミッドに組み込み、色々な細胞についてその発現を試みている。そかし尚、その発現による細胞機能の変化等を明らかにするに至っていない。
2.HLー60細胞分化における39K合成の生物学的意義を明らかにするため、39KアンチセンスDNAの合成をした。現在その影響を検索しているが、39K合成の低下によっては細胞分化は変化せず、目下39K合成の完全阻害をするための実験を模索している。
3.リコンビナント39K(r39K)をイ-ストに過剰生産させることに成功した。そして、このr39Kを使用し、その化学修飾によるPLA_2阻害活性、膜結合活性、リン酸化酵素の基質性等の変化について解析し、ヒスチジンの修飾がこれらの活性に大きく作用することを明らかにした。
4.前骨髄性白血病細胞HLー60は、発癌プロモ-タ(PMA)やDMSOでそれぞれマクロファ-ジや好中球様細胞に分化するが、その時39Kの遺伝子が発現することを明らかにした。
5.セリン、スレオニンホスファタ-ゼを特異的に阻害するオカダ酸により、HLー60細胞がマクロファ-ジ様細胞に分化することを明らかにし、その時もこの細胞の分化に伴い39Kの遺伝子が発現されることを明らかにした。

研究成果

• [文献書誌] Utsumi,K.,Sato,E.F.,Utsumi,T.and Edashige,K: "Role of membraneーsubstrate interaction on the activities of EGF receptor/kinase and protein kinase C" Cell Bioloby International Reports. 14. 108 (1990)
• [文献書誌] 佐藤 英介,田中 良和,枝重 圭祐,秋丸 国広,小渕 浩嗣,井上 正康,内海 耕慥: "モルモット好中球内アネキシンI(39K)の性質" 生化学. 62. 681 (1990)
• [文献書誌] 枝重 圭祐,佐藤 英介,内海 俊彦,内海 耕慥: "膜結合タンパク質リン酸化酵素の活性化における基質タンパクの膜結合依存性" 生化学. 62. 864 (1990)
• [文献書誌] 佐藤 英介,枝重 圭祐,秋丸 国広,内海 耕慥: "オカダ酸によるHLー60細胞のマクロファ-ジ様細胞への分化誘導と39K(アネキシンI)の発現" Cell Struct.& Funct.15. 455 (1990)
• [文献書誌] J.R.Dedman and V.L.Smith: "StimulusーResponse Coupling" CRC Press, 528 (1990)
• [文献書誌] C.Heizmann: "Novel calciumーbinding Proteins" SpringerーVerlag, (1991)