| 研究概要 |
シャトルベクタ-pZ189に紫外線照射し、紫外線DNA損傷修復欠損を有するヒトA、C、F群色素性乾皮症(XP)と正常細胞にトランスフェクトして突然変異の頻度・種類を解析した。pZ189にガンマ線照射してガンマ線高感受性であるアタキシア・テランジェクタシア(AT)患者細胞にトランスフェクトした。またpZ189のSV40部分をポリオ-マに代えたpYZ289を作成し、マウスのアルキル化剤損傷DNA修復酵素(AGTase)欠損細胞と正常細胞にトランスフェクトし、突然変異の種類・頻度を解析した。
紫外線照射後のpZ189生存率は、XPーA細胞が最も低く、正常細胞が最も高く、XPーC,F細胞は正常細胞とXPーA細胞の中間であった。pZ189の紫外線突然変異率は、逆に、XPーA細胞をレシピエントとした場合最も高く、正常細胞が最も低く、XPーC,F細胞は正常細胞との中間であった。各細胞につき約70個の突然変異体の塩基配列を決定した結果、transition突然変異が全ての細胞において多く(62ー84%),またそれは全てのXP相補性群細胞で正常細胞より有意に多かった。全ての細胞で、transitionのうち大部分がG:C→A:Tの変化であった。transversionのうち大部分はG:C→T:A、G:C→C:Gの変化であった。変異cytosineの5'側塩基にはpyrimidineの存在が有意に高かった。XP相補性群間では突然変異に有意差はなかった。またAT細胞におけるpZ189のガンマ線誘発突然変異頻度は正常細胞と差がなかった。マウスAGTase欠損細胞では正常細胞よりpYZ289の生存率が低く、突然変異率が高くG:C→A:T transitionの頻度が有意に高かった。
これらの結果はシャトルベクタ-を用いた変異検出系は、細胞のDNA修復能と突然変異誘発特性を反映し、DNA修復欠損遺伝病細胞における分子レベルの突然変異の質的、量的差異を明らかにできることがわかった。
|
