1992 年度実績報告書

ホスファチジルコリン代謝遺伝子の構造と発現

研究課題

研究課題/領域番号	03454149
研究機関	群馬大学
研究代表者	山下哲群馬大学, 医学部, 教授 (50025623)
研究分担者	杉本博之群馬大学, 医学部, 助手内田勉群馬大学, 医学部, 助手 (00160276) 保坂公平群馬大学, 医学部, 講師 (70108992)
キーワード	ホスホリパーゼD / リゾホスホリパーゼ / ホスファチジン酸 / 酵素精製 / 活性化 / 阻害 / 酵母リン脂質生合成 / 遺伝子発現
研究概要	1.ホスファチジルコリンホスホリパーゼDのホスファチジン酸による活性化酵素精製の過程でホスホリパーゼDの新しい活性化因子ホスファチジン酸を同定した。ホスファチジン酸は本酵素の産物でもあるので、これはホスホリパーゼDが自らの生成する産物で活性化されることを示す。この結果はアゴニスト刺激後、細胞内のホスファチジン酸、ジアシルグリセロールが長時間にわたり高レベルで維持されるという事実とよく一致している。 2.リゾホスホリパーゼの精製とホスファチジン酸による阻害リゾホスファチジルコリンには種々の生理活性があることが知られている。リゾホスホリパーゼはリゾホスファチジルコリンの細胞内レベルを決める重要な酵素なので精製を行なった。ラット肝臓上清画分から酵素を214,000倍精製したところ、標品はSDS電気泳動で分子量60,000の均一なバンドを示した。酵素はトランスアシラーゼ活性をも有し反応中間体としてアシル化酵素を生ずることが判明した。酵素はホスホリパーゼDの産物であるホスファチジン酸とホスホリパーゼA_2の産物であるアラキドン酸によって阻害された。したがってアゴニスト刺激によってリゾホスホリパーゼの活性は低下し、リゾホスファチジルコリンレベルの上昇が起こりアゴニスト刺激の効果が増強すると考えられ、リゾホスホリパーゼのシグナル伝達への関与が示唆された。 3.酵母リン脂質生合成系の遺伝子発現の調節酵母のリン脂質生合成酵素群の遺伝子発現はイノシトール、コリンによって一律に抑制されている。欠失変異、点変異を作成し、これには各遺伝子の上流に共通して存在するコンセンサス配列CATRTGAAが関与していることを明らかにした。またこれらのリン脂質合成酵素の発現に必要な遺伝子、RIC1、SCS1をクローニングし、構造を解析した。両遺伝子は転写因子をコードしていると考えられた。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Tsukagoshi,Y.: "Expression fo the CCT gene encoding cholinephosphate cytidylyltransferase of Saccharomyces cerevisiae in Escherichia coli" J.Bacteriol.173. 2134-2136 (1991)
[文献書誌] Nikawa,J.: "Isolation and characterization of two distinct myo-inositol transport genes of Saccharomyces cerevisiae" J.Biol.Chem.266. 11184-11191 (1991)
[文献書誌] Kodaki,T.: "Functional analysis of the regulatory region of the yeast phosphatidylserine synthase gene,PSS" J.Bacteriol.173. 7992-7995 (1991)
[文献書誌] Uchida,T.: "Molecular cloning,characterization,and expression in Escherichi coli of a cDNA encoding mammalian choline kinase" J.Biol.Chem.267. 10156-10162 (1992)
[文献書誌] Nikawa,J.: "IRE1 encodes a putative protein kinase containing a membrane-spanning domain and is required for inositol prototrophy in Saccharomyces cerevisiae" Mol.Microbiol.6. 1441-1446 (1992)
[文献書誌] Hosaka,K.: "Cloning of a human choline kinase cDNA by complementation of the yeast cki mutation" FEBS Lett.304. 229-232 (1992)
[文献書誌] Uchida,T.: "Methods in Enzymol. Vol209" Academic Press, 584 (1992)
[文献書誌] 山下哲: "新生化学実験講座 (第6巻)" 東京化学同人, 424 (1992)

1992 年度 実績報告書

ホスファチジルコリン代謝遺伝子の構造と発現

研究代表者

山下 哲 群馬大学, 医学部, 教授 (50025623)

研究成果

[文献書誌] Tsukagoshi,Y.: "Expression fo the CCT gene encoding cholinephosphate cytidylyltransferase of Saccharomyces cerevisiae in Escherichia coli" J.Bacteriol.173. 2134-2136 (1991)

[文献書誌] Nikawa,J.: "Isolation and characterization of two distinct myo-inositol transport genes of Saccharomyces cerevisiae" J.Biol.Chem.266. 11184-11191 (1991)

[文献書誌] Kodaki,T.: "Functional analysis of the regulatory region of the yeast phosphatidylserine synthase gene,PSS" J.Bacteriol.173. 7992-7995 (1991)

[文献書誌] Uchida,T.: "Molecular cloning,characterization,and expression in Escherichi coli of a cDNA encoding mammalian choline kinase" J.Biol.Chem.267. 10156-10162 (1992)

[文献書誌] Nikawa,J.: "IRE1 encodes a putative protein kinase containing a membrane-spanning domain and is required for inositol prototrophy in Saccharomyces cerevisiae" Mol.Microbiol.6. 1441-1446 (1992)

[文献書誌] Hosaka,K.: "Cloning of a human choline kinase cDNA by complementation of the yeast cki mutation" FEBS Lett.304. 229-232 (1992)

[文献書誌] Uchida,T.: "Methods in Enzymol. Vol209" Academic Press, 584 (1992)

[文献書誌] 山下 哲: "新生化学実験講座 (第6巻)" 東京化学同人, 424 (1992)

1992 年度実績報告書

山下哲群馬大学, 医学部, 教授 (50025623)

[文献書誌] 山下哲: "新生化学実験講座 (第6巻)" 東京化学同人, 424 (1992)