1993 年度実績報告書

プロティンキナーゼによる酵母遺伝情報発現の制御機構

研究課題

研究課題/領域番号	04404001
研究機関	東京大学
研究代表者	東江昭夫東京大学, 大学院・理学系研究科, 教授 (90029249)
研究分担者	松井泰東京大学, 大学院・理学系研究科, 助手 (50229407) 菊池淑子東京大学, 大学院・理学系研究科, 助教授 (00138124)
キーワード	プロティンキナーゼ / PHO系 / PHO85 / Saccharomyces cerevisiae / 出芽酵母
研究概要	Pho85キナーゼ活性の測定法の確立:GST-PHO85融合遺伝子がPHO85活性を持つことを確認した後、GST-PHO85遺伝子を発現させた酵母菌体の抽出液から抗-GST抗体で融合蛋白質を沈降させ、キナーゼ活性測定の酵素源とした。基質としてプロタミン、ミエリン塩基性タンパク、ヒストンH1、κ-カゼインを比較したところ、κ-カゼインがもっとも良い基質であったので、以後これを基質として用いた。野生型酵母を、高リン酸培地と低リン酸培地で培養し、Pho85活性の時間経過を調べたところ、pho85活性は培養を通じて、また、低リン酸培地中でホスファターゼが脱抑制される条件下でも変化しなかった。 GST-PHO80およびmyc-PHO80融合遺伝子はPHO80活性を持つ。この融合遺伝子を高発現した酵菌体の抽出液から、抗-GST、あるいは、抗-myc抗体で免疫沈降する蛋白質はPho85キナーゼ活性を持っていた。この事実は、Pho80蛋白質とPho85蛋白質が複合体を作っていることを強く示唆する。さらに、Pho80蛋白質はPho85キナーゼによりin vitroでもリン酸化されることがわかった。指定部位突然変異誘発法によりATP結合ドメインとPSTAIRE領域に向けて種々の塩基置換を導入し、そのPho85活性を相補性試験で調べた。PHO85Y18Fと同様にPHO85T17Aも優性構成性を示した。PHO85Y18Eは野生型と同様の表現型を示した。PHO85Y18Fのキナーゼ活性は野生型のものに比べて低かった。この結果は、同様のアミノ酸置換を持つ変異型分裂酵母のcdc2キナーゼやCdc28キナーゼが示す結果と異なり、Y/F置換の第三番目の効果といえる。さらに、PSTAIREの変異PHO85R53Aは優性で不活型のPho85キナーゼを形成することがわかった。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Yokoo,T.et al.: "Putative phosphoinositicle-specific phospholipase C gene,PLCI,of yeast Saccharomyces cererisiae is important for cell growth." Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90. 1804-1808 (1993)
[文献書誌] Toh-e,A.et al.: "Three yeast genes PIR1,PIR2,and PIR3,containing interaol tandem repeats are related to each other and PIR1 and PIR2 are required for tolerance to heartshock" Yeast. 9. 481-494 (1993)
[文献書誌] Shirayama,M.et al.: "MSI3,a multicopy suppressor of mutants hyper activated in the RAS-cAMP pataway,encodes on novel HSP70 protein of Saccharomyces cerevisiae." Mol.Gen.Genet.240. 323-332 (1993)
[文献書誌] Fujimura,K.et al.: "A dominant interfering mutation in RAS1 of Saccharromyces cerevisiae" Mol.Gen.Genet.241. 280-286 (1993)
[文献書誌] Kominami,K.et al.: "Characterization of the function of the NINI geme product of Saccharomyces cerevisiae." Expt.Cell Res.211(in press). (1994)
[文献書誌] Fujino,M.et al.: "Characterization of PHO85 kinase of Saccharomyces cerevisiae" Pho 93.eds.E.Yagil.,S.Silver. (in press). (1994)

1993 年度 実績報告書

プロティンキナーゼによる酵母遺伝情報発現の制御機構

研究代表者

東江 昭夫 東京大学, 大学院・理学系研究科, 教授 (90029249)

研究成果

[文献書誌] Yokoo,T.et al.: "Putative phosphoinositicle-specific phospholipase C gene,PLCI,of yeast Saccharomyces cererisiae is important for cell growth." Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90. 1804-1808 (1993)

[文献書誌] Toh-e,A.et al.: "Three yeast genes PIR1,PIR2,and PIR3,containing interaol tandem repeats are related to each other and PIR1 and PIR2 are required for tolerance to heartshock" Yeast. 9. 481-494 (1993)

[文献書誌] Shirayama,M.et al.: "MSI3,a multicopy suppressor of mutants hyper activated in the RAS-cAMP pataway,encodes on novel HSP70 protein of Saccharomyces cerevisiae." Mol.Gen.Genet.240. 323-332 (1993)

[文献書誌] Fujimura,K.et al.: "A dominant interfering mutation in RAS1 of Saccharromyces cerevisiae" Mol.Gen.Genet.241. 280-286 (1993)

[文献書誌] Kominami,K.et al.: "Characterization of the function of the NINI geme product of Saccharomyces cerevisiae." Expt.Cell Res.211(in press). (1994)

[文献書誌] Fujino,M.et al.: "Characterization of PHO85 kinase of Saccharomyces cerevisiae" Pho 93.eds.E.Yagil.,S.Silver. (in press). (1994)

1993 年度実績報告書

東江昭夫東京大学, 大学院・理学系研究科, 教授 (90029249)