研究概要 |
タンパク分解酵素潅流法により、モルモット肝から分離肝細胞を作製した。分離肝細胞浮遊液にFura-2AMを負荷したのち、蛍光強度比により、細胞内Ca^<2+>濃度を測定した。ハロセンは1,3,5,10MACに相当する量を注入した。また、トリパンブルー染色を肝細胞分離後、Fura-2AM負荷後、ハロセン注入後に行ない、肝細胞の生存率を評価した。 その結果、(1)静止期肝細胞内Ca^<2+>濃度は約150nMであり、細胞生存率は86.5%であった。(2)ハロセン添加により、細胞内Ca^<2+>濃度はハロセン濃度依存性に増加し、肝細胞生存率はハロセン濃度依存性に低下した。 つまり、ハロセンによって細胞内Ca^<2+>濃度は上昇し、しかも、その上昇と細胞生存率の低下には相関関係がみられ、ハロセン濃度依存性に肝傷害の生じることが明らかになった。 次に、この原因を明らかにするため、Ca^<2+>無添加の培養液を用いて、上記と同様の実験を行なった。 その結果、(1)静止期肝細胞内Ca^<2+>濃度は約280nMであり、細胞生存率は59.8%であった。(2)ハロセン添加により、細胞内Ca^<2+>濃度肝細胞生存率はハロセン濃度依存性に低下した。 以上より、ハロセンによる肝細胞内Ca^<2+>濃度の上昇は、肝細胞膜がハロセンにより傷害を受けたために生じることが明らかになった。
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