迅速核酸分析法を用いた実験動物腸内に生息する腸内細菌の分類とモニタリング法の確立

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07458227
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 伊藤 喜久治 東京大学, 大学院・農学生命化学研究科, 助教授 (50100045)
• 研究分担者: 伊藤 豊志雄 実験動物中央研究所, 室長 (20106644) ; 笹川 千尋 東京大学, 医科学研究所, 教授 (70114494)
• キーワード: 腸内細菌 / PCR / 実験動物 / プライマー

研究概要

前年度までにBacteroides、Prevotella、Porphyromonasの各クラスター特異的プローブうぇを作製し、極めて高い特異性を示したことから分離菌株の一次スクリーニングに有用であることを明らかとなった。
本年度は、各クラスター内の菌種別プローブを作製し、その特異性の確認を行った。各クラスター内の菌種特異的なプローブを16S rRNAのデータベースを基にデザインした。BacteroidesクラスターではB.ovatus、B.uniformis、B.eggerthii、B.fragilis、B.uniformis、B.vulgatusについて各プローブを作製した。Porphyromonasクラスターでは、P.asaccharolytica、P.circumdentaria、P.gingivalis、P.salivosa、B.distasonis、B.splanchnicus、R.microfususについて作製した。PrevotellaクラスターではP.melaninogenica、P.denticola、P.corporis、P.disiens、P.buccalis、P.buccae、P.loeschrellについてプローブをデザインした。
その結果、今回作製した種特異的プローブは基準株を用いた試験ではきわめて特異性が高かった。また、分離株を用いた試験でも生物・生化学性状で同定した33菌株のうち12株でプローブを用いた同定結果と一致しなかった。一致しなかった株について16S rRNAのシークエンスを調べたところ生物・生化学的性状の同定が誤りであったことが判明した。
以上のように、16S rRNAのシークエンスを基にしたプローブによる分子生物学的同定法は、従来の生物・生化学的性状による同定法に比べて正確かつ容易に菌の同定ができるものと考える。

研究成果

• [文献書誌] Narashima,S., Itoh,K., Sankai,T., Takasaka,M., Otani,I. & Yashikawa,Y.: "Chamges in Normal Vaginal Flara of African Green Monkeys (Cercopithecus aethiops) during Menstruul Cycle." Exp.Anim.46(1). 47-52 (1997)
• [文献書誌] Suzuki,T., Itoh,K., Kaneko,T. & Suzuki,H.: "Inhibition of bacterial translocation from, the gastrointestinal tract of mice by oral odministration of a culture condensate of Bifidobacterium lagin" J.Vet.Med.Sci.59(8). 665-669 (1997)
• [文献書誌] Itoh,K.& Yanabe,M.: "Gnotobiology in laboratory aminal prodnction. Germfree Life and its Ramifications" XII ISG Publising Committee,Shiozawa. 13-15 (1996)
• [文献書誌] Nakayama,M., Itoh,K. & Takahashi,E.: "Cyclophosphamide-induced bacterial translocation in Escherichia coli C25-monoassociated specific Pathagen-free mice" Microbiol.Immunol.41(8). 587-593 (1997)