慢性関節リウマチの関節破壊に対するHVJリポゾーム法を用いた遺伝子治療-関節内へのcDNA、antisense delivery systemによる新治療法の確立-

1995 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07557098
• 研究種目: 試験研究(B)
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 越智 隆弘 大阪大学, 医学部, 教授 (80112035)
• 研究分担者: 大脇 肇 大阪大学, 医学部, 助手 (60223872) ; 木村 友厚 大阪大学, 医学部, 助手 (80167379) ; 金田 安史 大阪大学, 細胞工学センター, 助教授 (10177537)
• キーワード: 慢性関節リウマチ / 遺伝子導入 / Hemagglutinating virus of Japan / 関節軟骨 / リポゾーム / 修復靱帯 / ヒト血小板由来増殖因子

研究概要

SV40large T抗原(SVT)遺伝子を発現ベクターに組み込んだプラスミドを含むHemagglutinating virus of Japan(Sendai virus;HVJ)リポゾームをラット膝関節内へ直接投与することにより、関節軟骨への外来遺伝子導入に成功した。外来遺伝子の発現は表層関節軟骨の約30%に認められ、少なくとも3週間は導入効率の衰退は認められなかった。また関節内投与による全身的影響を検討したが、肺、心、肝、腎、脾臓における外来遺伝子の発現は認めず他の臓器での影響はないことが明らかとなった。関節内でのHVJリポゾームによる炎症反応、免疫反応組織傷害性なども認められず本法の安全性が確認された。さらにHVJリポゾームをベクターとして、修復膝蓋腱の創内への直接遺伝子導入を試み、導入後約4週間にわたり創内の数パーセントの細胞に持続的に外来遺伝子を発現させることに成功した。さらにこの創内の細胞へのβ-galactosidase遺伝子導入による選択的標識により、創内の細胞が組織修復に伴い腱組織全長にわたり遊走する現象を見いだした。ヒト血小板由来増殖因子(PDGF-BB)遺伝子を修復膝蓋腱に導入し、その早期効果を検討した。その結果PDGF-BB遺伝子は導入後約4週にわたり創部およびその周辺部に過剰発現し、血管新生とタイプ1、3コラーゲンを中心とした基質合成の亢進が確認された。

研究成果

• [文献書誌] Tanabe M.,et al.: "Remarkable elevation of interleukin 6 and interleukin 8 levels in the bone marrow serum of patients with rheumatoid arthritis." Journal of Rheumatology. 21. 830-835 (1994)
• [文献書誌] Tomita T.,et al.: "Phenotypic characterisitics of bone marrow cells in patients with rheumatoid arthritis." Journal of Rheumatology. 21. 1608-1614 (1994)
• [文献書誌] Wakitani S.,et al.: "Elevated interleukin-1 levels in polymorphonuclear cells accumulating in bone marrow adjacent to affected joints in rheumatoid arthritis." Japanese Journal of Rheumatology. 5. 243-250 (1994)
• [文献書誌] Kaisho T.,et al.: "BST-1,a surface molecule of bone marrow stromal cell lines that facilitates pre-B cell growth." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 91. 5325-5329 (1994)
• [文献書誌] Hirohata S.,et al.: "Selective induction of IgM rheumatoid factors by CD14+monocyte-lineage cells generated from bone marrow of patients with rheumatoid arthritis." Arthritis and Rheumatism.38. 384-388 (1995)
• [文献書誌] Hirohata S.,et al.: "Accelerated generation of CD14+monocyte lineage cells from the bone marrow of rheumatoid arthritis patients." Arthritis and Rheumatism.(in press.).