慢性関節リウマチの関節破壊に対するHVJリポゾーム法を用いた遺伝子治療-関節内へのcDNA、antisense delivery systemによる新治療法の確立-

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 07557098
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 越智 隆弘 大阪大学, 医学部, 教授 (80112035)
• 研究分担者: 冨田 哲也 大阪大学, 医学部, 助手 (30283766) ; 林田 賢治 大阪大学, 医学部, 助手 (50273686) ; 金田 安史 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (10177537)
• キーワード: 慢性関節リウマチ / 転写因子 / おとり型核酸医薬 / 遺伝子治療 / 関節破壊 / 創修復 / 肝細胞増殖因子 / Hemagglutinating virus of Japan(HVJ)

研究概要

本年度は実験的関節炎モデルであるラットコラーゲン関節炎を用いた。ラットコラーゲン関節炎でもヒト慢性関節リウマチと同様にその病態形成にはIL-1やTNF-aが重要な役割を果たしていることが知られている。我々はまず、関節内増殖滑膜においてこれらサイトカインの遺伝子発現を調節している転写因子であるNFkBの活性の上昇をgel shift mobility assayにて確認した。ついでNFkBに対するおとり型核酸医薬(デコイ)をHVJ-リポゾーム法を用い、明らかに関節炎を発症している足関節内に投与した。HVJ-リポゾーム法を用いることによりデコイは関節滑膜内に高率に長期間導入された。デコイ導入関節では有意に関節腫脹が抑制され、デコイ投与後7週でのレ線的あるいは組織学的検討でも関節破壊は有意に抑制された。すなわちNFkBに対するおとり型核酸医薬による遺伝子治療により関節局所の破壊が抑制できる可能性が示唆された。また創修復においては、ラット膝蓋靱帯に創を作成後5日目にHVJ-リポゾーム法を用い肝細胞増殖因子(HGF)の遺伝子を直接導入した。経時的に修復靱帯の組織切片を作成しtype Iコラーゲンに対する免疫染色とマッソントリクローム染色を行った。遺伝子導入後4週目でコントロールと比較し基質沈着の増大とコラーゲン繊維の配列の改善が認められた。

研究成果

• [文献書誌] Tomita T., et al.: "In vivo direct gene transfer into joints using HVJ-liposomes." Trans ORS. 20. 250 (1995)
• [文献書誌] Nakamura N., et al.: "Direct in vivo gene transfer into healing patellar ligament" Trans ORS. 20. 14 (1995)
• [文献書誌] Tomita T., et al.: "In vivo direct gene transfer into joints using HVJ-liposomes." Journal of Cellular Biochemistry. 21A. 385 (1995)
• [文献書誌] Tomita T., et al.: "In vivo direct gene transfer into articular cartilage using HVJ-liposomes." Arthritis and Rheumatism. 38. S398 (1995)
• [文献書誌] Nakamura N., et al.: "Early effect of in vivo introduction of platelet-derived growth factor(PDGF)gene into healing patellar ligament." Trans ORS. 21. 193 (1996)
• [文献書誌] Nakamura N., et al.: "Transient introduction of a foreign gene into healing rat patellar ligament." Journal of Clinical Investigation. 97. 226-231 (1996)
• [文献書誌] Tomita T., et al.: "In vivo direct gene transfer into articular cartilage by intraarticular injection mediated by HVJ(Sendai virus)and liposomes." Arthritis and Rheumatism. 40. 901-906 (1997)
• [文献書誌] Ozkan I., et al.: "Direct gene transfer to healing rat patella tendon by intra-articular delivery of HVJ-liposomes." Trans ORS. 22. 431 (1997)