| 研究概要 |
1.方法
1)検体: MEN2A11家系、FMTC3家系の86名と家族性の明らかでない甲状腺髄様癌(MTC)4名、MEN2B6名を対象とした。末梢血10mlを用いた。
2)RET癌遺伝子エクソン10, 11の点突然変異の解析;エクソン10,11を挟むように制限酵素EcoRIsiteを含むプライマーを設定した。エクソン10はFEとLEプライマーを,エクソン11はJEとHEプライマーを用いて,アニーリング62℃で35サイクルPCRを行った。
3)制限酵素を用いた家系解析; PCR産物をエタノール沈殿で精製後、制限酵素で消化し、電気泳動を行った。ハンドパターンを確認し、制限酵素siteの有無を確認した。
4)結果:すべての検体で、エクソン10は199pb,エンソン11は279bpに増幅された。MEN2A, FMTCでシスシャルをコードしているコドン618, 620, 634でgermline mutationが検出された。点突然変異により制限酵素RsaI(GT/AC), CfoI(GCG/C), AluI(AG/CT)svteの出現することが確認された。
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