| 研究課題/領域番号 |
08671608
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
小黒 恵司 自治医科大学, 医学部, 講師 (90231232)
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| 研究分担者 |
増沢 紀男 自治医科大学, 医学部, 教授 (60049038)
川合 述史 自治医科大学, 医学部, 教授 (00073065)
太田 敏子 筑波大学, 基礎医学系, 助教授 (40233134)
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| キーワード | 脳虚血 / グルタミン酸受容体 / Ca^<2+>-ATPase / プロテインキナーゼC / スライス / 海馬 / 砂ネズミ |
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| 研究概要 |
1.原形質膜Ca^<2+>-ATPase抗体の作製、免疫組織化学
ラット脳より、分子生物学的手法によりCa^<2+>-ATPase TypeII抗体が作製され、Western blottingによるラット脳での特異性の検討を終えたところである。今後、正常及び虚血ラットを用いて免疫組織化学的検討を行う予定である。
2.砂ネズミ海馬スライスを用いた電気生理学的実験
砂ネズミを5分間の総頚動脈結紮により虚血負荷を行い、1-2日後に海馬スライス標本を作成し、実体顕微鏡下、微小電極法によりCA1錐体細胞から興奮性シナプス後電流(EPSC)、あるいは集合シナプス後電位(EPSP)を記録した。
(1)グルタミン酸受容体のうち非NMDA型受容体のサブユニット特異的阻害剤であるクモ毒素JSTXおよび新たに合成した多数のアナログ化合物について、虚血後の錐体細胞におけるグルタミン酸電流に対する効果をしらべた。その結果、海馬スライス上で、JSTX及び仮称MU81,270.273の3種で虚血性変化を抑制する効果を持つことが分かった。現在、生体脳室内投与を試行中
(2)グルタミン酸受容体としては専ら非NMDA型受容体のみが神経細胞死におけるに遅発性のCa^<2+>流入に強く関与すると考えられていた。今回我々は、非NMDA型受容体の競合的阻害剤であるCNQX灌流下に得られるNMDA型EPSPが0.1-10Hzの低頻度反復刺激により、周期的(約1cycle/min)に電位の大きさを変化させる現象を発見し、本現象が脳虚血による細胞内Ca^<2+>の増加及びプロテインキナーゼCの増加に基ずくことを明らかにした。脳虚血とNMDA型グルタミン酸受容体を結びつける結果として興味深い。
2,3の結果の一部は、最近2年間の脳神経外科学会総会及び日本神経科学会にて発表した。3の結果は現在投稿中。
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