| 研究課題/領域番号 |
09671258
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 東京慈恵会医科大学 |
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研究代表者 |
秋葉 直志 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (10192907)
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| 研究分担者 |
朝倉 潤 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (80287193)
尾高 真 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (20233554)
塩谷 尚志 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (70226108)
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| キーワード | 肺癌 / 癌遺伝子 / FHIT gene |
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| 研究概要 |
肺癌におけるFHIT(fragile histidine ttiad)遺伝子の異常について
【目的】手術検体を用いてFHIT geneの解析を行い、臨床病期、予後との相関を検討しFHIT geneの肺癌発生に対する意味を検討する.
【方法】
1.・肺癌手術時の腫瘍を液体窒素で凍結する.
・検体からFast Track KitでPoly A mRNAを抽出する.
・cDNA cycle Kitを用いてReverstranscriptase処理し、cDNAを抽出する.
・FHIT geneに特異的なPCR primerでcDNAを鋳型としてPCRを行い、FHIT geneを増幅する.
2.・凍結標本からSOGENを用いてRNAを抽出する.
・FHIT geneを増幅する.
a.PCR産物を電気泳動し、エチジウムブロマイド染色し異常バンドを検出する.
b.spricing errorを同定する.
3.異常の頻度と肺癌の臨床病期、予後、病理学的所見との関係を検討する.
【結果】1.方法1で検体5例に対してPCRを行ったが、FHIT geneの異常は認めなかった.
2.方法2で8例にFHIT geneの増幅には成功した.異常バンドの検出はできなかった.
3.現在7例について実験中である.
【考察】方法1ではPCRにてFHIT geneは増幅しなかった.検体採取方法(凍結、保存)に欠陥があり、RNAの破壊等がみられ、RNA収量が不足した事が原因と考える.
方法2ではPCRにてFHIT geneは増帽しておりRNAの単離の方法は正しいと思われる.
異常バンドの検出ができなかったのは、実験上のエラー(検体中の正常組織と癌細胞のpopulationの問題、腫瘍組織中の正常遺伝子が優位に検出されている)の可能性もあり、肺癌にはFHIT geneが関与しないと判断するには今後の検討を要する.更に検体数を増やし検討を行う.
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