チロシンキナーゼをプローブとした感染免疫機構の解析

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09836007
• 研究機関: (社)北里研究所
• 研究代表者: 森川 裕子 北里研究所, 基礎研究所, 室長 (20191017)
• 研究分担者: 塚本 俊彦 北里大学, 薬学部, 助教授 (10236862) ; 壇原 宏文 北里大学, 薬学部, 教授 (40114558) ; 片桐 拓也 国立精神神経センター神経研究所, 診断研究部, 科学技術特別研究員 (70126100) ; 松井 英則 北里研究所, 基礎研究所, 室長補佐 (30219373) ; 菊池 雄士 北里研究所, 基礎研究所, 室長 (60262078)
• キーワード: マクロファージ分化 / チロシンキナーゼ / Pyk2 / アイソフォーム / 感染免疫 / サルモネラ

研究概要

チロシンキナーゼPyk2の機能を解析することを目的として、Jurkat T細胞ならびにWEHI231B細胞のPyk2高発現株を樹立した。樹立した細胞株は、正常のPyk2、我々が見いだしたプロリンリッチ領域を部分欠失したPyk2、キナーゼ活性を欠損したPyk2、N端側のチロシンをフェニルアラニンに置換したもの、及び、C端側のチロシンをフェニルアラニンに置換したもの、計5種類の高発現株である。これらのPyk2高発現Jurkat T細胞株を用い、T細胞抗原レセプターとCD28の共刺激後におけるMAPキナーゼ、JNK、p38の活性化ならびにIL-2の産生について親株Jurkat T細胞と比較検討した。その結果、Pyk2がJNKの活性化を介してTリンパ球におけるIL-2産生に関与すること、その際、Pyk2の活性とN端側チロシンのリン酸化が必須であること、が明らかになった。さらに、Pyk2がVavに会合することを新たに明らかにした。Vavは、免疫系細胞特異的に発現され、small G proteinのRhoやRacの活性化因子であり、RacはJNKを活性化することが知られているので、このことから、Pyk2によるJNKの活性化が説明されうる。
一方、WEHI231 B細胞のPyk2トランスフェクタントの解析からは、酸化ストレス(1mMH_2O_2)によってBリンパ球に引き起こされるJNKの活性化にPyk2が関与していることが新たに判明した。
チロシンキナーゼFynならびにChkのノックアウトマウスを用いたサルモネラ感染実験は、現在、基礎条件の検討を終了して、感染後の免疫系の動態を検討中である。また、同様の感染実験を目的として、不活性型Pyk2をTリンパ球において高発現するトランスジェニックマウスを作成している。

研究成果

• [文献書誌] K.Katagiri, H.Yokosawa, T.Kinashi, S.Kawashima, S.Irie, T.Katagiri, et al: "Ubiquitin-proteasome system is involved in the induction of LFA-1/ICAM-1-dependent adhesion of HL-60 cells" J.Leukocyte Biol.in press. (1999)
• [文献書誌] K.Sato, K.Katagiri, S.Hattori, T.Tsuji, S.Irimura, S.Irie, & T.Katagiri: "Laminin 5 promotes the activation and apoptosis of T cells expressing α3β1 integrin" Exp.Cell Res.in press. (1999)
• [文献書誌] P.Gulig, T.Doyle, J.Huges, & H.Matsui: "Analysis of host cells associated with the spv-mediated intracellular growth rate of Salmonella typhimurium in mice" Infect.Immun.66. 2471-2485 (1998)
• [文献書誌] K.Sekiya, H.Danbara, Y.Futaesaku, A.Haque, N.Sugimoto, & M.Matsuda: "Formation of ring-shaped structures on erythrocyte membranes after treatment with botulinolysin, a thiol-activated hemolysin from Clostridium botulinum" Infect.Immun.66. 2987-2990 (1998)
• [文献書誌] Y.Morikawa, W.-H.Zhang, D.Hockley, M.Nermut, & I.Jones: "Detection of a trimeric human immunodeficiency virus type 1 Gag intermediate is dependent on sequences in the matrix protein, p17" J.Virol.72. 7659-7663 (1998)
• [文献書誌] T.Tsukamoto, Y.Shibagaki, Y.Niikura, & K.Mizumoto: "Cloning and characterization of three human cDNAs encoding mRNA(guanine-7-)methyltransferase, an mRNA cap methylase" Biochem.Biophys.Res.Commun.251. 27-34 (1998)