APC遺伝子の変異機序に関する研究

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10470129
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 金丸 龍之介 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (70152783)
• 研究分担者: 鈴木 貴夫 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (90292276) ; 柴田 浩行 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (50260071) ; 石岡 千加史 東北大学, 加齢医学研究所, 助教授 (60241577)
• キーワード: APC / ミスマッチ修復遺伝子 / MSH2 / ストップコドンアッセイ法

研究概要

1、APC遺伝子の変異機序の解析を出芽酵母を用いたアッセイ系でモデル化するために,MLH1,MSH2,PMS1変異株を作製した。(ミスマッチ修複遺伝子)。
2、APC遺伝子の変異高密度集中領域(Mutation cluster Region)を中心とした約1.7kbの領域をAPC遺伝子異常のほとんどの異常型であるframeshift型変異とnonsense変異をほぼ100%検査可能なmodified SC assayを構築した。これにより5-FOA plateを用いて、変異APC遺伝子のpositive selectionが可能となった。
3、野生型酵母株と変異株酵母株を用いて、富栄養液体培地による培養で、APC遺伝子に変異を導入(1)(DNA複製によるエラー)し、(2)によるアッセイ法によりスクリーニングを行ない、キヤピラリー自動シーケンサーを用いて解析を行なった。
4、以上より、野生型酵母株と、ミスマッチ修複遺伝子異常酵母株でのAPC遺伝子変異スペクトラムは、野生型では、塩基置換によるnonsense変異、変異株では、simple repeat sequence部分のinsertion又はdeletionによるframe Shift mutationが多いことが明らかとなった。
現在データベースの母数の追加と共に、DNA障害性化学発癌物質含有培養を用いたAPC遺伝子変異をスクリーニング中である。

研究成果

• [文献書誌] Suzuki T,Ishioka C,Kato S., Mitachi Y, et al.: "Detection of APC mutations by a Yeast-based Protein truncation Test (YPTT)."Genes Chromosome & Cancer. 21. 290-297 (1998)
• [文献書誌] Osada M,Ishioka C,Kanamaru R,Shuntaro I. et al.: "Cloning and functional analysis of human p51,which structurally and functionally resembles p53"Nature Medcine. 4-7. 839-843 (1998)
• [文献書誌] Shimodaira H,Shibata H,Suzuki T,Kanamaru R,Ishioka C et al.: "Functional analysis of human MLH1 mutations in saccharomyces cevevisidae"Nature Genetics. 19. 384-389 (1998)
• [文献書誌] Simada A,Kanamaru R,Ishioka C et al.: "The transcriptional Activities of p53 and Its Homologue p51/p63 : Similarities and Differences"Cancer Research. 59. 2781-2786 (1999)
• [文献書誌] Sunahara M,Ishioka C,Ikawa S et al.: "Mutational analysis of p51/p63, a p53 homologene, in non small cell lung cancer and breast cancer"Oncogene. 18. 3761-3765 (1999)
• [文献書誌] Kato S,Kanamaru R,Ishioka C et al.: "Effects of p51/p63 Missense mutations on Transcriptional Activities of p53 Downstream genes Promoters."Cancer Research. 59. 5908-5911 (1999)
• [文献書誌] Han SH,Suzuki T,Shibata H,Ishioka C,Kanamaru R, et al.: "Functional elaluation of _pTEN missense mutations using in vitro phosinositide phosphatase assay."Cancer Research. 60. 3147-3151 (2000)
• [文献書誌] Kato H,Suzuki T,Shibata H,Ishioka C,Kanamaru R et al.: "Functional evaluation of p53 and pTEN Mutations in Gliomas."Clinical Cancer Research. 6. 3937-3943 (2000)