進行性腎障害に対する遺伝子治療

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10470217
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 今井 圓裕 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (00223305)
• 研究分担者: 猪阪 善隆 大阪大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 金田 安史 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (10177537) ; 守山 敏樹 大阪大学, 健康体育部, 講師 (30283815)
• キーワード: 遺伝子治療 / TGF-β / 腎炎 / 間質線維化 / アンチセンス / HVJリポソーム法

研究概要

1.メサンジウム増殖性腎炎モデルである抗Thy-1腎炎モデルラットにおいて、TGF-β受容体-IgG Fcキメラ蛋白発現ベクターを筋肉に遺伝子導入することによる実験腎炎の遺伝子治療を試み、その糸球体硬化病変に及ぼす影響を検討した。抗Thy-1腎炎の糸球体のmRNAレベルはキメラ分子発現ベクター導入群でTGF-βならびに1型コラーゲンのmRNAが抑制されていることが確認された。また、病変惹起7日後の糸球体PAS染色像においても細胞外基質産生が強く抑制されていることが確認された。以上、このキメラ分子発現ベクターをラット抗Thy-1腎炎モデルに導入することにより、筋肉で過剰発現したキメラ分子は腎糸球体に作用しTGF-βによる細胞外基質産生作用を抑制することが確認された。
2.TGF-βが過剰発現し間質細胞の形質転換、線維化に関与していることが報告されている一側尿管結紮モデルを用いて、腎間質線維化に対してTGF-βアンチセンスオリゴによる遺伝子治療法の有効性について検討した。はじめに、改良型HVJリポソーム法によりFITCラベルしたオリゴDNAをラット尿管より逆行性に腎臓へ導入したところ、10分後、すでにFITCラベルしたオリゴDNAが、腎髄質のみならず皮質の間質細胞の核にも集積していることが確認された。次にTGF-βに対するアンチセンスあるいはスクランブルオリゴをラット尿管より逆行性に腎臓へ導入した。TGF-βアンチセンスオリゴの腎間質細胞への導入により、TGF-β,I型コラーゲンmRNAの発現が抑制されるとともに、スクランブルオリゴを導入した群に比し、腎間質の線維化が抑制された。改良型HVJリポソーム法を用いた腎間質細胞へのTGF-βアンチセンスオリゴ導入は、間質線維化に対する遺伝子治療法として有効な方法となりうることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Nakamura H,Isaka Y,et al.: "Electroporation-Mediated PDGF Receptor-IgG Chimera Gene Transfer Ameliorated Experimental Glomerulonephritis"Kidney Int.. (2001)
• [文献書誌] Tsujie M,Isaka Y,et al.: "Prolonged Transgene Expression in Glomeruli Using an Epstein-Barr Virus Replicon Vector System Combined with AVE Type HVJ Liposomes"kidney Int.. (2001)
• [文献書誌] Isaka Y,et al: "Introduction of transforming growth factor-beta 1 antisense digodeosynucleotides into renal interstitial fibroblasts blodes interstitial fibrosis in unilate valureteral obstruction"kidney Int,. 58. 1885-1892 (2000)
• [文献書誌] Tsujie M,Isaka et,al: "Gene transfer targeting interstitial fibroblasts by the artificial viralenvelope type hemagglutinating virus of Japan liposome method."Kidney Int.. 57. 1973-1980 (2000)
• [文献書誌] Isaka Y,et al: "Gene therapy by transforming growth factor-beta receptor-IgG Fc chimera suppressed extracellular matrix accumulation in experimental glomerulonephritis"Kidney Int.. 55. 465-475 (1999)
• [文献書誌] Imai E,Isaka Y: "Strategies of gene transfer to the kidney"Kidney Int. 53. 264-272 (1998)