2001 年度実績報告書

バイオ研究支援機器としての無細胞遺伝子翻訳装置の開発

研究課題

研究課題/領域番号	10555287
研究機関	名古屋大学
研究代表者	山根恒夫名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 教授 (70026102)
研究分担者	関口哲日本製粉(株), 中央研究所, 主任研究員津久井貞至 (株)トミー精工, 開発本部, 主任研究員中野秀雄名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 助教授 (00237348)
キーワード	無細胞蛋白質合成 / 遺伝子の転写 / 遺伝子の翻訳 / バイオリアクター / ATP / 蛋白質の安定化 / 大腸菌S30画分 / 小麦胚芽抽出液
研究概要	実験室レベルで必要とされる数ミリグラム程度の活性ある蛋白質を、遺伝子から出発して数日で取得できるような機器を開発すること、またそれに使用する大腸菌由来のS30抽出液の大量調製法、さらにその抽出液の高活性化高機能化をめざして、以下のような成果を得た。 1.名古屋大学分担分ガラスビーズを菌懸濁液に加え、容器を激しく振る方式の細胞破壊装置(商品名ビーズショッカー)をS30抽出液調製に使用し、好成績を得た。一度に最大約50mlのS30抽出液が得られた。この細胞破壊装置の最適な操作条件を確立した。また、大腸菌S30抽出液を用いる系でジスルフィド結合を形成し活性のある蛋白質を合成する条件を確立した。 2.(株)トミー精工分担分処理量0.1〜0.3mlの超小型で密閉式の透析器を開発した。この透析器によってS30抽出液を用いた無細胞遺伝子の転写/翻訳反応を実施して、12時間で約1.2mg/mlクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼが合成できた。 3.日本製粉(株)分担分大腸菌S30抽出液の液体窒素中での保存安定性を調べ、約1年間十分安定であることがわかった。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Junhao Yang: "In Vitro Analysis of Roles of a Disulfide Bridge and a Calcium Binding Site in Activation of Pseudomonas sp. Strain KWI-56 Lipase"Journal of Bacteriology. 182・2. 295-302 (2000)
[文献書誌] Yugo Iwasaki: "Imporlance of Disulfide Bridge Formation on Folding of Phospholipase D from Streptomyces antibioticus"Journal of Bioscience and Bioengineering. 89・5. 506-508 (2000)
[文献書誌] Hideo Nakano: "Single-Step Single-Molecule PCR of DNA with a Home-Priming Sequence Using a Single Primer and Hot-Startable DNA Polymerase"Journal of Bioscience and Bioengineering. 90・4. 456-458 (2000)
[文献書誌] Xiuping Jiang: "Dosage Effect of Minor Arginyl-and Isoleucyl-tRNAs on Protein Synthesis in an Escherichia coli In Vitro Coupled Transcription/Translation System"Journal of Bioscience and Bioengineering. 91・1. 53-57 (2001)
[文献書誌] Xiuping Jiang: "Diminishment of protein degradation by using protease-deficient mutant in Escherichia coli cell-free protein synthesis system"Journal of Bioscience and Bioengineering. 93・2. 151-156 (2002)
[文献書誌] Suang Rungpragayphan: "High-throughput, cloning-independent protein library construction by combining single-molecule DNA amplification with in vitro expression"Journal of Molecular and Biology. (印刷中). (2002)
[文献書誌] 山根恒夫: "組換えタンパク質生産法、第4章、pp. 169-180"学会出版センター. 12 (2001)

2001 年度 実績報告書

バイオ研究支援機器としての無細胞遺伝子翻訳装置の開発

研究代表者

山根 恒夫 名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 教授 (70026102)

研究成果

[文献書誌] Junhao Yang: "In Vitro Analysis of Roles of a Disulfide Bridge and a Calcium Binding Site in Activation of Pseudomonas sp. Strain KWI-56 Lipase"Journal of Bacteriology. 182・2. 295-302 (2000)

[文献書誌] Yugo Iwasaki: "Imporlance of Disulfide Bridge Formation on Folding of Phospholipase D from Streptomyces antibioticus"Journal of Bioscience and Bioengineering. 89・5. 506-508 (2000)

[文献書誌] Hideo Nakano: "Single-Step Single-Molecule PCR of DNA with a Home-Priming Sequence Using a Single Primer and Hot-Startable DNA Polymerase"Journal of Bioscience and Bioengineering. 90・4. 456-458 (2000)

[文献書誌] Xiuping Jiang: "Dosage Effect of Minor Arginyl-and Isoleucyl-tRNAs on Protein Synthesis in an Escherichia coli In Vitro Coupled Transcription/Translation System"Journal of Bioscience and Bioengineering. 91・1. 53-57 (2001)

[文献書誌] Xiuping Jiang: "Diminishment of protein degradation by using protease-deficient mutant in Escherichia coli cell-free protein synthesis system"Journal of Bioscience and Bioengineering. 93・2. 151-156 (2002)

[文献書誌] Suang Rungpragayphan: "High-throughput, cloning-independent protein library construction by combining single-molecule DNA amplification with in vitro expression"Journal of Molecular and Biology. (印刷中). (2002)

[文献書誌] 山根恒夫: "組換えタンパク質生産法、第4章、pp. 169-180"学会出版センター. 12 (2001)

2001 年度実績報告書

山根恒夫名古屋大学, 大学院・生命農学研究科, 教授 (70026102)