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カベオリンは細胞膜の非クラスリン系被覆小胞カベオレを構成する一群の膜貫通タンパク質であり、カベオリン-3は筋特異的に発現するアイソフォームである。1998年にカベオリン-3遺伝子異常による肢帯型筋ジストロフィーの症例が相次いで2つのグループから報告され、筋ジストロフィーの病態機構におけるこのタンパク質の関与が推測される。本研究においては、カベオリン-3欠損マウスおよびカベオリン-3とジストロフィンの二重欠損マウスを作成し、それらのマウスでの筋の病理学的変化を明らかにすることを目的にして筋ジストロフィーの本態を探ろうとする。
本年度の実験計画としては、(1)相同組換えによってカベオリン-3遺伝子に変異のあるマウスES細胞を得る。(2)カベオリン-3変異遺伝子を持つキメラマウスを得る。(3)キメラマウスを交配してカベオリン-3変異遺伝子を持つES細胞由来の子孫マウス(F1)を得る。(4)F1ヘテロ変異マウス同士の交配によりF2ホモ変異マウスを得て、それぞれの病態を調べる。ことであった。
(1)においては、昨年度に単離して解析したマウスのカベオリン-3ゲノム遺伝子から変異遺伝子を構築し、マウスES細胞に導入した。変異遺伝子を導入したES細胞をスクリーニングして、目的とする相同組換え体3クローンを得た。(2)においては、増殖させた独立の3クローンそれぞれをマウス胚盤胞に注入して、キメラマウスを得た。(3)雄キメラマウスと雌B6マウスを交配して、カベオリン-3変異遺伝子を持つES細胞由来のF1マウスを得た。(4)F1マウスのTail DNAを用いたPCRにより、ヘテロ変異マウスを確認した。現在ヘテロマウス間の交配を実施している。
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