| 研究課題/領域番号 |
10671103
|
|---|
| 研究機関 | 東京大学 |
|---|
研究代表者 |
畠山 卓弥 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (60291324)
|
|---|
| 研究分担者 |
宮田 哲郎 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (70190791)
濱田 洋文 癌研究会, 化学療法センター・分子生物治療研究部, 教授
重松 宏 東京大学, 医学部・附属病院・血管外科, 助教授 (40134556)
大城 秀巳 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (80272558)
|
|---|
| キーワード | 血管新生 / 遺伝子組換え / アデノウィルス / bFGF / 閉塞性動脈硬化症 |
|---|
| 研究概要 |
昨年度の報告書内で、我々はbFGF分泌型アデノウィルスベクター(AxCAMAssbFGF)をウサギ線維芽細胞に導入し、導入細胞から充分な活性度を有するbFGFの細胞外への発現を認めたことを記載した。その後、導入細胞を用いてのウサギ下肢慢性虚血モデルにおける側副血行路の発達評価の現在までの状況を以下に示す。
(1)下肢慢性虚血モデルの作製・ウィルスベクター導入と投与
日本白色ウサギ(雄,3.0-3.5kg)の片側大腿部の鼠径靱帯〜膝部に切開をおき大腿動脈を完全切除することにより大腿部への血行が内腸骨動脈からの側副血行路のみに依存するモデルを作製すると同時に、皮膚切片を採取し線維芽細胞の初代培養を行った。培養細胞が100mm dishにてconfluentな段階(5×10^6個以上)を確認し、手術後20日目にAxCAMAssbFGFまたはAxCALacZを導入した(20pfu/cell)。ウィルス導入24時間後(手術後21日目)に左総頚動脈より3-Frカテーテルを患側内腸骨動脈内に留置し導入細胞を動脈内投与した。
(2)血管新生の評価法
A;Calf blood Pressure Ratio〜モデル作製直後、導入細胞投与前後、投与後28日目に両側下腿後脛骨動脈収縮期動脈圧比を計測する、B;Angiographic Score〜導入細胞投与後28日目に患側内腸骨動脈造影を施行し大腿内側部での側副血行路発達を評価する、C;Blood Flow〜内腸骨動脈造影施行直前にFlo-wireを内腸骨動脈内に留置し安静時/最大内腸骨動脈流量を計測する、D;Capillary Density〜動脈撮影後に患側内転筋を採取し凍結切片をアルカリフォスファターゼ染色し検鏡する。
(3)現況
上記A〜Dの方法を用いてAxCAMAssbFGF群/AxCALacZ群各10羽にて比較する予定である。
|
