| 研究概要 |
1.顆粒神経細胞の分化過程で,代表的な遺伝子の特定領域クロマチンの構造変化を,本研究で開発したDNase I/定量PCR法を用いて解析したところ,ほぼ予想どおりの結果が得られた.すなわち,構成的に発現している遺伝子(βアクチンなど)では全培養期間を通じてDNase I感受性が高く,全く発現していないβグロビンでは感受性を示さなかった.一方,トポIIβの活性に依存した発現誘導を示すClass I遺伝子では培養経時的にDNase I感受性が上昇し,トポII特異的阻害剤ICRF-193で活性を阻害した場合その上昇は抑制された.しかし,発現誘導にトポIIβが必要でない(ICRF-193に感受性を示さない)Class II遺伝子の場合,培養開始直後から感受性は高く,以後大きな変化は認められなかった.これらの結果は,凝縮状態にあるClass I遺伝子クロマチンをトポIIβが脱凝縮することにより,転写誘導が可能になることを示唆している.
2.前年度に行ったマクロアレイでの検索により同定されたClass I遺伝子の中から,2つの遺伝子(Sodium channel β1とRAD GTPase)についてさらに詳細な解析を行うことにし,これらの領域を含むラットゲノムのBACクローンを取得した.RAD GTPase遺伝子については隣接遺伝子を含む約20kbの塩基配列を決定し,来年度に予定しているトポIIβ作用部位(切断部位)と核マトリックス付着領域(MAR)の詳細なマッピング,及びDNase I/定量PCR法によるクロマチン構造変化の解析への準備が整った.
|
