色素性乾皮症モデルマウスを用いた色素性乾皮症遺伝子治療

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 11670825
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 錦織 千佳子 京都大学, 医学研究科, 講師 (50198454)
• キーワード: 色素性乾皮症 / XPAモデルマウス / 遺伝子治療 / pCHA / pCAGGS / 不定期DNA合成

研究概要

色素性乾皮症(XP)は紫外線によってDNAに生じた傷を修復する酵素を欠損するために、日光露光部に皮膚癌を生じる、高発癌性遺伝疾患で日本では除去修復能が低く、露光部の皮膚癌の発症も早く、神経症状を伴う相補性A群が最も多い。ヒトヘの遺伝子治療を目指して、まずXPモデルマウスでの遺伝子治療の開発を行った。導入する遺伝子は将来のヒトヘの応用を目指してひとXPA遺伝子とした。最近遺伝子導入のひとつの方法として効率の高い導入が可能とされているHVJリポゾームにXPA遺伝子を封入してXPAマウス細胞へ導入し、修復能の回復、細胞への傷害性の程度を分析し、XPA-HVJ-リポゾームの効果を評価した。ベクターはサイトメガロウイルスのエンハンサーとβ-actionのプロモーターをもつpCAGGSにヒトXPAcDNAを組み込んだpCAGGS-XPA並びにpcDNA3のEcoRIサイトにXPA遺伝子を組み込みHAtagをつけたpcHA-XPAを用いた。XPAマウスは大阪大学田中亀代次博士より供与を受けた。ベクターののHVJ-リポゾームヘの封入には大阪大学金田安史博士の協力を得た。予め紫外線照射24、48時間前にXPA-HVJ-リポゾームをXPAマウスの背部皮膚に皮内注射しておき、同部のUVB4kJ/m2紫外線照射後のUDSを測定した。同時に照射4時間後の皮膚片でのピリミジンダイマー、(6-4)光産物の修復動態をそれぞれに特異的なモノクローナル抗体(金沢大学二階堂博士より供与)を用いて確認した。XPA-HVJリポゾームはコントロールリポゾームに比して明らかに紫外線照射後の不定期DNA合成能(UDS)の回復をさせ、ヒトXPA遺伝子がin vivoのマウス細胞で働くことが確認された。XPA-HVJリポゾーム処理群はコントロールリポゾームに比して、表皮、真皮ともにダイマー、(6-4)光産物の染色性が低かった。

研究成果

• [文献書誌] Matsui M,Nishigori C.,Toyokuni S.,Takada,J.Akaboshi M.Isikawa M,Imamura S.Miyachi Y: "The role of oxidative DNA damage in Human Arsenic Carcinogenesis Detection of 8-Hydoroxy-2'-Deoxyguanosine in Arsenic-Related Bowen's Disease"J.invest.Dermal. 112. 101-106 (1999)
• [文献書誌] Nishigori C: "UV-induced DNA damage in carcinogenesis and its repair"J.Dermatol.Sci.
• [文献書誌] Takashi Y,Matsumura Y.Sato M,Nishigori C,Mori T,*liber A.Takebe H: "Complete resolution of normal DNA repair characteristics in Group F xeroderma pigmentsum cells by over-expression of transfected XPF cDNA"Carcinogenesis. 19. 55-60 (1998)
• [文献書誌] Matsumura,Y.,Nishigori,C.Yagi,T.Imamura,S.Takebe,H: "Characterization of molecular defects in xeroderma pigmentosum group F in relation to its clinically mild symptoms"Hum.Mol.Genet. 7. 969-974 (1998)
• [文献書誌] Nishigori,C. Yarosn,D.B., Shrealny,V. Ullrich, S.E.Cox, P.Kripke: "HindIII liposomes suppress delayed-type hypersensitivity responses in vivo and production of epidermal IL-10 in vitro"J.Immuno.. 161. 2684-2691 (1998)
• [文献書誌] Matsumura Y,Nishigori C,Yagi T,Imamura S and Takabe H: "Mutations of p16/p15 Tumor Suppressor Genes and Replication Error Contribute Independently to the Pathogenesis of Sporadic Malignant Melanoma"Archive Dermatol Res. 28. 175-180 (1998)