炎症性サイトカイン関連遺伝子変異マウスを用いて歯周組織破壊と再生の機序を解析する

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12307041
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 山口 朗 長崎大学, 歯学部, 教授 (00142430)
• 研究分担者: 柴田 恭明 長崎大学, 歯学部, 助手 (80253673) ; 藤田 修一 長崎大学, 歯学部, 助手 (00181355) ; 高橋 弘 長崎大学, 歯学部, 助教授 (20124597) ; 加藤 有三 長崎大学, 歯学部, 教授 (20014128) ; 原 宜興 長崎大学, 歯学部, 教授 (60159100)
• キーワード: 歯周病 / サイトカイン / TNF / TNF受容体 / IL-1 / ノックアウトマウス

研究概要

今年度は次のような実験を行い、以下の結果を得た。
1.歯周病モデルの作成
正常マウスの歯肉にlipopolysaccharaide(LPS)を注射して、周囲の骨組織の変化を組織学的に解析した結果、LPS投与によって歯牙周囲の骨組織の破骨細胞性骨吸収が亢進することが明らかとなった。
2.TNF受容体欠損マウス
TNFreceptor type I(TNFRI)およびTNFreceptor typc II(TNFRII)の各受容体ノックアウトマウス及び両受容体ノックアウトマウスを米国Jackson Laboratoriesから購入したが、入荷の時期が予定より大幅に遅れたために、現時点ではこれらのマウスの歯周組織破壊に関する十分な解析が進行していない。現在までに以下の実験を行った。TNFRI欠損マウスの大腿骨に歯科用エンジンで直径2mmの円形の骨欠損を作成し、骨再生の過程を野生型マウスと比較して形態学的に解析したが、骨再生過程には大きな差がみられなかった。また、新生仔TNFRI欠損マウスの頭蓋冠から骨芽細胞様細胞を分離し、TNFRI欠損骨芽細胞様細胞株の樹立を試みている。TNRFII及びTNFRI/TNFRII欠損マウスは現在繁殖中である。
3.IL-1alphaまたはIL-1beta欠損マウスを東京大学医科学研究所の岩倉教授より供与していただき、現在各マウスを繁殖中である。
4.正常マウス胎児長管骨の器官培養系を用いてin vitroにおける骨吸収評価系を確立するための基礎実験を検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Shibata S,Fujita S,Takahashi H,Yamaguchi A,Koji T: "Assessment of decalcifying protocols for detection of specific RNA by nonradioactive in situ hybridization in calcified tissues."Histochem.Cell Biol.. 113. 153-159 (2000)
• [文献書誌] Kobayashi H,Gao Y-H,Ueta C,Yamaguchi A,Komori T: "Multilineage differentiation of Cbfa1-deficient calvarial cells in vitro."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 273. 630-636 (2000)
• [文献書誌] Enomoto-Iwamoto M,Nakamura T,Aikawa T,Higuchi Y,Yuasa T,Yamaguchi A,Nohno T,Noji S,Matsuya T,Kurisu K,Koyama E,Pacifici M,Iwamoto M: "Hedgehog proteins induce chondrogenic cell differentiation and cartilage formation."J.Bone Miner.Res.. 15. 1659-1668 (2000)
• [文献書誌] Kataoka H,Ochi M,Enomoto K,Yamaguchi A: "Cloning and embryonic expression patterns of the zebrafish Runt domain genes, runxa and runxb."Mech Dev. 98. 139-143 (2000)
• [文献書誌] Yamaguchi A,Komori T,Suda T: "Regulation of Osteoblast Differentiation Mediated by BMPs, Hedgehogs and Cbfa1."Endocrine Reviews. 21. 393-411 (2000)
• [文献書誌] 山口朗(分担執筆): "骨形成と骨再生.先端医療シリーズ・歯科医学2:「歯周病-新しい治療を求めて」"岡田宏,石川烈,村山洋二監修. 1-7 (2000)
• [文献書誌] Yamaguchi A(分担執筆): "Regulatory mechanism of osteoblast differentiation. In : Tissue Engineering for Therapeutic Use 4"Y.lkada and Y.Shimizu (eds). 75-81 (2000)