研究課題/領域番号 |
12309003
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研究機関 | 東京大学 |
研究代表者 |
幕内 雅敏 東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (60114641)
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研究分担者 |
東條 英昭 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (20041668)
菅原 寧彦 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (90313155)
成瀬 勝俊 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50291323)
澤崎 徹 , 農学部・附属牧場, 教授 (00012047)
酒井 康行 東京大学, 生産技術研究所, 講師 (00235128)
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キーワード | ハイブリッド型人工肝臓 / トランスジェニック / マイクロマニピュレーション / ヒトアルブミン遺伝子 / EGFP遺伝子 |
研究概要 |
平成12年度においては、ヒトアルブミンを発現する形質転換マウスを作出する目的で、まず、ヒトアルブミン+EGFP連結遺伝子の構築を行った。すなわち、ヒトアルブミンcDNA PILMALB5(pUC19ベクター。ヒューマンサイエンス研究資源バンクより購入)のシークエンスを行い、末端の欠けていることが判明した14塩基配列分を新たに結合した。これに、プロモーターとして、全身臓器で発現性のサイトメガロウィルス・エンハンサー、β-アクチン(CAG)を、そして、マーカー遣伝子としてクラゲの発光遺伝子であるEGFP遺伝子(pCX-EGFP:大阪大学より人手)を連結した遺伝子CAG/hALBcDNA/CAG/EGFPを構築した。本研究費により購入したマイクロマニピュレーション装置を含む形質転換動物作製用顕微鏡一式を用いて、上記連結遣伝子を、B6C3F1マウス受精卵前核にマイクロインジェクションした。さらに、体外で培養して桑実胚〜初期胚盤胞に発生させた上で、蛍光顕微鏡によりin vivoで観察して形質転換胚を選別し、それらを偽妊娠ICRマウスの子宮へ移植して仔マウスを得ることを、現在繰り返し試みている。一方、pSV2neoをベクターとしてNHI3T3細胞に上記連結遣伝子を導入し、in vitroにおける発現を調べている。平成13年度は、マウス実験において、ヒトアルブミンの発現を肝臓及び他臓器において解析し、さらに、形質転換マウスを交配させ、ヒトアルブミンを肝臓において発現するマウスのストレインを作る。マウス実験にて成果を得た後は、東京大学農学部附属牧場にて、ミニブタの受精卵に上記連結遣伝子を導入する予定である。
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