2000 年度実績報告書

C型肝炎ウイルスの複製酵素と複製を標的とした阻害剤のデザイン開発

研究課題

研究課題/領域番号	12558084
研究機関	金沢大学
研究代表者	村上清史金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)
研究分担者	大藤努北斗科学産業, 研究員野村孝弘金沢大学, がん研究所, 助手 (80115261)
キーワード	HCV NS5B / RNA複製 / RdRP活性 / アラニンスキャンニング
研究概要	HCV関連肝細胞がんの予防の重要な標的は、HCVの持続感染の遮断である。宿主とは異なるRNA複製の中心酵素はHCV NS5BのRNA合成酵素(RdRP)である。NS5Bの構造と機能の系統的な解析とHCV複製の研究から、RNA複製阻害剤のデザインの提出が必要である。本年度の主要な成果は、1.7アミノ酸を連続的にアラニンに置換した27種の変異NS5Bを作成し、精製NS5Bを用いたin vivoのRdRP活性等の検討を行った結果、すでに報告されているaa317のグルタミン酸残基以外に新たに5アミノ酸残基(E18、Y191、C274、Y276及びH502)がRdRP活性に必須な残基として特定された。2.鋳型RNA能を欠損し、RdRP活性を示したすべての変異NS5Bは、鋳型/プライマーRNA結合能で正常であり、Y276のみがRdRP活性とRNA結合能を全て欠損していた(Hepatology in press)。3.NS5B結晶モデルから、活性中心から離れて位置するE18及びH502が、NS5BのOligomer化に関わる可能性を検討した。その結果、全ての変異の中でこの2残基のみがNS5BのOligomer化能を欠損していた。NS5BのOligomer化がRdRPに必須であることが、2残基の相互置換等の実験により示された(投稿準備中)。以上の結果は、1.従来から同定された核酸合成酵素間で保存されたmotifs以外にHCV RdRP活性に寄与する残基が存在し、HCV RdRP特異性のある阻害剤の可能性を示した。2.RdRP活性には鋳型RNA結合能ではなく鋳型/プライマー結合能が必要であり、Y276は鋳型/プライマー結合に必要なアミノ酸残基として特定された。3.HCV RdRP活性にNS5BのOligomer化が必須であることから、Oligomer化を指標とした阻害剤の可能性が新たに提示された。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] S.W.Kee, et al.: "Human Hepatitis B Virus X protein is a possible mediator of hypoxia induced angiogenesis in hepatocellular carcinoma."Biochem.Res.Communs.. 268. 456-461 (2000)
[文献書誌] K.Masutomi, et.al,.: "Teromerase Activity Reconstituted in Vitro with Purified Human Teromerase Reverse Transcriptase and Human Teromerase RNA Component."J.Biol.Chem.. 275. 22568-22573 (2000)
[文献書誌] Qin,W., et al.: "Mutational Analysisof the Structure and Functions of Hepatitis C Virus RNA-dependent RNA polymerase."Hepatol.. (in press). (2001)
[文献書誌] Wei,W. et al.: "Direct interaction between the subunit RAP30 of TFIIF and RNA polymeras subunit5 (RPB5) which contributes to the association between TFIIF and RNA polymerase II."J.Biol.Chem. (in press). (2001)
[文献書誌] Dorjsuren,D., et al.: "B型肝炎ウイルス(HBV)Xタンパクに拮抗する新規タンパクRMP。"実験医学. 18. 1137-1141 (2000)
[文献書誌] 増富健吉: "昆虫細胞発現系を用いたヒトテロメアーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製。"バイオインダストリー. 17. 35-42 (2000)
[文献書誌] 村上清史: "ヒトテロメアーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製とヒトテロメアーゼ活性の試験管内の再構成。"教育通信. (印刷中). (2001)

2000 年度 実績報告書

C型肝炎ウイルスの複製酵素と複製を標的とした阻害剤のデザイン開発

研究代表者

村上 清史 金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)

研究成果

[文献書誌] S.W.Kee, et al.: "Human Hepatitis B Virus X protein is a possible mediator of hypoxia induced angiogenesis in hepatocellular carcinoma."Biochem.Res.Communs.. 268. 456-461 (2000)

[文献書誌] K.Masutomi, et.al,.: "Teromerase Activity Reconstituted in Vitro with Purified Human Teromerase Reverse Transcriptase and Human Teromerase RNA Component."J.Biol.Chem.. 275. 22568-22573 (2000)

[文献書誌] Qin,W., et al.: "Mutational Analysisof the Structure and Functions of Hepatitis C Virus RNA-dependent RNA polymerase."Hepatol.. (in press). (2001)

[文献書誌] Wei,W. et al.: "Direct interaction between the subunit RAP30 of TFIIF and RNA polymeras subunit5 (RPB5) which contributes to the association between TFIIF and RNA polymerase II."J.Biol.Chem. (in press). (2001)

[文献書誌] Dorjsuren,D., et al.: "B型肝炎ウイルス(HBV)Xタンパクに拮抗する新規タンパクRMP。"実験医学. 18. 1137-1141 (2000)

[文献書誌] 増富健吉: "昆虫細胞発現系を用いたヒトテロメアーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製。"バイオインダストリー. 17. 35-42 (2000)

[文献書誌] 村上清史: "ヒトテロメアーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製とヒトテロメアーゼ活性の試験管内の再構成。"教育通信. (印刷中). (2001)

2000 年度実績報告書

村上清史金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)