2002 年度実績報告書

C型肝炎ウイルスの複製酵素と複製を標的とした阻害剤のデザイン開発

研究課題

研究課題/領域番号	12558084
研究機関	金沢大学
研究代表者	村上清史金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)
研究分担者	草川貴史北斗科学産業, 研究員林直之金沢大学, がん研究所, 助手 (50253456)
キーワード	HCV NS5B / アラニンスキャニング / RNA依存RNA合成酵素(RdRP) / 鋳型 / プライマー結合 / HCV複製 / NS5A / オリゴマー / ヌクレオリン
研究概要	HCVの持続感染の遮断が肝がん発症のリスクを低下させると期待される。RNA依存RNA合成酵素(RdRP)であるNS5BはHCVの複製の中心的な酵素であり、HCVの持続感染の遮断を目的にした薬剤開発の有力な標的である。HCV複製の阻止を目標に、HCV NS5Bの構造と機能の検討を行った。今年度我々は、1)NS5BのRdRP活性の測定に各種の合成RNAを鋳型とした反応において、組換え型NS5Btは、poly(U)及びpoly(G)を鋳型としてRdRP活性を示さなかった。他方、poly(C)とpoly(A)は鋳型として働き、poly(C)の場合には、プライマーが存在しない条件でも、de novoのGMP合成の開始が観察された。2)NS5BのC端21アミノ酸が欠損したNS5Btは、培養細胞系でGFP融合型として発現させると、核内に局在し、全長型NS5Bは、核周辺の膜成分に局在する。我々は、核小体マーカーとなるヌクレオリンを指標に検討した結果、ヌクレオリンと全長型NS5Bの膜構造での共局在を見い出し、培養細胞系で内在性ヌクレオリンとNS5B或いはNS5Btとの特異的な結合を見い出した。相互作用の領域は、ヌクレオリンのC端側のRNA結合ドメイン4とRGDドメインが必要であり、NS5Bでは、集約型アラニン置換変異ライブラリーを用いた解析から、2つの領域に限定された。これらのヌクレオリン結合欠損のNS5Bの変異で、全長NS5Bとヌクレオリンの共局在は観察されなかった。部分精製したGST融合型ヌクレオリンを部分精製して、NS5BtのRdRP活性への効果を検討した結果、NS5B結合性を示すヌクレオリン断片は、量依存的にRdRP活性を阻害した(Hirano et al.,J. Biol. Chem.,in press,2003)。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Qin, W., et al.: "Oligomeric interaction of Hepatitis. C Virus NS5B is critical for catalytic activity of RNA dependent RNA polymerase"J.Biol.Chem.. 277. 2132-2137 (2002)
[文献書誌] Arai, K., et al.: "Two independent regions of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) are important for their oligomerization and telomerase activity"J.Biol.Chem.. 277. 8536-8544 (2002)
[文献書誌] Shirota, Y. et al.: "Hepatitis C Virus NS5A Binds RNA-Dependent RNA Polymerase NS5B and modulates RdRP activity"J.Biol.Chem.. 277. 11149-11155 (2002)
[文献書誌] Masutomi, K., et al.: "Identification of serum anti human telomerase reverse transcriptase (hTERT) auto-antibodies during progression to hepatocellular carcinoma"Oncogene. 21. 5946-5950 (2002)
[文献書誌] Maida, C., et al.: "Direct activation of telomerase by EGF through Ets-mediated transactivation of TERT via MAP kinase signaling pathway"Oncogene. 21. 4071-4079 (2002)
[文献書誌] Hayashi, N., Murakami, S.: "STM1, a gene which encods a guanine quadruplex binding protein interacts with CDC13 in Saccharomyces cerevisiae"Mol.Genet.Genomics. 267. 806-813 (2002)

2002 年度 実績報告書

C型肝炎ウイルスの複製酵素と複製を標的とした阻害剤のデザイン開発

研究代表者

村上 清史 金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)

研究成果

[文献書誌] Qin, W., et al.: "Oligomeric interaction of Hepatitis. C Virus NS5B is critical for catalytic activity of RNA dependent RNA polymerase"J.Biol.Chem.. 277. 2132-2137 (2002)

[文献書誌] Arai, K., et al.: "Two independent regions of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) are important for their oligomerization and telomerase activity"J.Biol.Chem.. 277. 8536-8544 (2002)

[文献書誌] Shirota, Y. et al.: "Hepatitis C Virus NS5A Binds RNA-Dependent RNA Polymerase NS5B and modulates RdRP activity"J.Biol.Chem.. 277. 11149-11155 (2002)

[文献書誌] Masutomi, K., et al.: "Identification of serum anti human telomerase reverse transcriptase (hTERT) auto-antibodies during progression to hepatocellular carcinoma"Oncogene. 21. 5946-5950 (2002)

[文献書誌] Maida, C., et al.: "Direct activation of telomerase by EGF through Ets-mediated transactivation of TERT via MAP kinase signaling pathway"Oncogene. 21. 4071-4079 (2002)

[文献書誌] Hayashi, N., Murakami, S.: "STM1, a gene which encods a guanine quadruplex binding protein interacts with CDC13 in Saccharomyces cerevisiae"Mol.Genet.Genomics. 267. 806-813 (2002)

2002 年度実績報告書

村上清史金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)