遺伝子治療による眼内増殖の制御と網膜神経細胞保護、その分子機構の解明

2000 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 12671730
• 研究機関: 関西医科大学
• 研究代表者: 緒方 奈保子 関西医科大学, 医学部, 講師 (60204062)
• 研究分担者: 金田 安史 大阪大学, 大学院・医学研究科・遺伝子治療学講座, 教授 (10177537) ; 松村 美代 関西医科大学, 医学部, 教授 (30144380) ; 山本 千加子 関西医科大学, 医学部, 助手 (80288844)
• キーワード: 遺伝子治療 / 神経保護 / 血管新生 / 網膜変性 / HVJ-リポソーム / 神経細胞死 / 脈絡膜新生血管 / 光凝固

研究概要

1.レーザー光凝固実験
1)培養網膜色素上皮の汎光凝固実験。
光凝固後、形質転換増殖因子(TGFβ)の発現は増加していた。塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)、およびIL-8の発現も一時的に上昇するがすぐに低下した。血管新生因子の転写因子であるETS-1,nuclear factor kappa B(NF-kB)も、72時間後には光凝固前のレベルより低下していた。網膜色素上皮の産生する血管新生抑制因子の増加や血管新生因子の低下が、光凝固後の血管新生抑制効果をもたらすと考えられた。
2)PEDF(Pigment epithelium derived factor)の発現。PEDFは、強力な血管新生抑制作用もつ。培養網膜色素上皮やラット網膜を光凝固するとPEDFの発現が上昇していた。光凝固後、網膜色素上皮から産生されるPEDFが血管新生を抑制していると考えられた。
2.ラット実験的脈絡膜新生血管モデル
1)HVJ-リポソーム法による遺伝子治療。
HVJ-リポソーム法で、NFk-Bに対する2重鎖デコイ型核酸を導入し、血管新生因子誘導の抑制を試みた。その結果、脈絡膜新生血管からの透過性が抑制され、血管新生が抑制できた。遺伝子導入でサイトカインの発現を制御し、脈絡膜新生血管の治療ができることをがわかった。
2)PEDFの発現。新生血管発生の早期に新生血管組織でPEDFの発現が強くみられ、退縮期には発現が弱まるものの、増殖した網膜色素上皮にはPEDFmRNAの発現が強くみられた。脈絡膜新生血管は、血管新生因子と抑制因子のバランスで発生し、網膜色素上皮から産生されるPEDFが退縮を促進すると考えられた。
3.眼圧上昇-網膜虚血灌流障害モデル実験。
神経保護因子でもあるPEDFを投与し、その変化を検討した。その結果PEDFの投与で網膜神経細胞が保護されることがわかった。

研究成果

• [文献書誌] Nahoko Ogata,Joyce Thombran-Tinket al.: "Pigment Epithelium Derived Factor as a Neuroprotective Agent against Ischemic Retinal Injury"Current Eye Research. Vol.20(In press). (2001)
• [文献書誌] Nahoko Ogata,Akira Ando,Masanobu Uyama et al.: "Expression of Cytokines and Transcription Factors in Photocoagulated Human Retinal Pigment Epithelial Cells"Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. Vol.239(In press). (2001)
• [文献書誌] 緒方奈保子,西村哲哉 他: "Pigment Epithelium Derived Factor(PEDF)の硝子体内濃度"臨床眼科. 54巻(In press). (2001)
• [文献書誌] 緒方奈保子: "分子生物学からみた網膜色素上皮の病態"臨床眼科. 54巻(In press). (2001)
• [文献書誌] 緒方奈保子: "脈絡膜新生血管とサイトカイン-遺伝子治療へ"Practical Ophthalmology. 58. 112-118 (2000)
• [文献書誌] 緒方奈保子 他: "実験的脈絡膜新生血管におけるPigment epithelial derived-factor(PEDF)の発現"厚生省特定疾患網脈絡膜萎縮研究班 平成12年度報告書. (In press). (2001)
• [文献書誌] 緒方奈保子: "Practical Ophthalmology 65.網膜色素上皮"文光堂. 3 (2000)
• [文献書誌] 緒方奈保子: "眼科 New Mook創傷治癒"金原出版. 6 (2001)