慢性関節リウマチ治療のためのNFkBデコイオリゴヌクレオチド徐放化剤の開発

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13558109
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 金田 安史 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (10177537)
• 研究分担者: 佐野 明彦 住友製薬株式会社, 製剤技術研究所・創剤研究グループ, 主任研究員 ; 冨田 哲也 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30283766) ; 森下 竜一 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (40291439)
• キーワード: NFkB / デコイオリゴヌクレオチド / 慢性関節リウマチ / 遺伝子治療 / HVJ-liposome / 遺伝子導入 / 徐放化製剤 / 転写因子

研究概要

我々は転写因子NFkBのDNA結合ドメイン(GGGATTTCCC)を含むデコイオリゴヌクレオチドをコラーゲン誘発関節炎ラットに対してHVJ-liposomeを用いて導入し、関節破壊の抑制、炎症の著明な軽減に成功した。NFkBデコイの組織内での長期サプライを可能にすれば年単位でのRA治療が可能になる。そこでHVJ-1iposomeを徐放可能なポリマーを開発し、NFkBを含有するHVJ-liposome自体を組織内に停留させ、長期の供給を可能にすることを試みた。FITCラベルしたオリゴヌクレオチド200ugを封入したHVJ-anionic liposome(10mg lipid;封入率約20%)を沈殿させ、これをpoly-D, L-lactic acid(MW 6500)-polyethylene glycol(MW 3000)block polymerに封入させた。これをラット筋肉内に埋め込んだところ、1ヵ月以上にわたって骨格筋細胞内に蛍光オリゴの取り込みが見られた。今回の研究ではHVJ-liposomeが細胞融合機能を維持したままポリマー内に封入されたのか、蛍光オリゴのみが安定に徐放化されたのかは不明であるので、現在、その条件について検討中である。また一方、コラーゲン製剤中にNFkBのデコイオリゴの封入が可能になった。これを用いた培養細胞及び組織内でのNFkBデコイオリゴの長期徐放化について、TNF-alphaで刺激後のサイトカインの産生の抑制効果を指標に経日的に検討中である。NFkBデコイオリゴの細胞内移行を迅速に効率よく行わせるために、当初機能ペプチドを予定していたが、それよりもはるかにすぐれたHVJ envelope vectorの開発に成功した。これを用いると蛍光ラベルしたNFkBデコイオリゴをサルの関節内に注入し、滑膜、軟骨細胞まで導入する事が可能であった。

研究成果

• [文献書誌] Tsuboniwa, N., et al., Kaneda, Y.: "Safety evaluation of HVJ-AVE liposomes in nonhuman primates"Hum. Gene Therapy. 12. 469-487 (2001)
• [文献書誌] Nakamura, N., et al., Kaneda, Y.: "Efficient transfer of intact oligonucleotides into the nucleus of ligament scar fibroblasts by HVJ-cationic liposomes is correlated With effective antisense gene inhibition"J. Biochem.. 129. 755-759 (2001)
• [文献書誌] Kawamura, I., et al., Kaneda, Y.: "Intravenous injection of oligodeoxynucleotides to the NF-kappaB binding site inhibits hepatic metastasis of M5076 reticulosarcoma in mice"Gene therapy. 8. 905-912 (2001)
• [文献書誌] Ueno, T., et al., Kaneda, Y., Matsuda, H.: "Nuclear factor-kB decoy attenuates neuronal damage after global brain ischemia ; a future strategy for brain protection during circulatory arrest"Cardiopulomonary Support and Physiology. 122. 720-727 (2001)
• [文献書誌] Yokoseki, O., et al., Kaneda, Y., Isobe, M.: "cis Element decoy against nuclear factor-kB attenuates development of experimental autoimmune myocarditis in rats"Circulation Research. 89. 899-906 (2001)
• [文献書誌] Yoshimura, S., et al., Kaneda, Y., Ogihara, T.: "Inhibition of intimal hyperplasia after balloon injury in rat carotid artery model using cis-element decoy of nuclear factor-kB binding site as a novel molecular strategy"Gene Therapy. 8. 1635-1642 (2001)
• [文献書誌] Kaneda, Y.: "Frontiers in Human Genetics"World Scientific. 396 (2001)