| 研究概要 |
申請者は,細菌性リポ多糖(LPS)刺激でマクロファージ内で強くリン酸化されるp65/L-plastinを同定した。p65は白血球に特異的に発現され,calcium(Ca),calmodulin,β-actin結合部位を有する多機能タンパク質で,リン酸化と細胞内Caによって接着分子β_2-integrin(CD11b/CD18)を介した細胞接着活性を制御している。Toll-like receptor(TLR)4の機能欠損のためLPSに不応答なC3H/HeJマウスでは,p65のリン酸化がおこらず,細胞接着活性が亢進せず,グラム陰性菌に対し易感染性であることから,細胞接着に基づく細胞動員が感染防御上,極めて重要と考えられる。菌体成分認識分子-細胞内シグナル伝達-p65リン酸化-細胞動員の感染防御態勢整備での重要性を明らかにするため,以下を実施した。(1)TLR KOマウスについて:TLR4,TLR2,TLR9 KOマウス,およびMyD88 KOマウスを繁殖しその遺伝型を決定し,実験に供した。(2)p65/L-plastinに関して:マウスp65/L-plastinリコンビナント蛋白およびモノクローナル抗体を調製した。白血球以外の組織に発現されるplastin isoform(T-plastin)のリコンビナント蛋白を作製し。モノクロの特異性を決定した。p65と細胞内で結合することが示されたgrancalcinのリコンビナントタンパク質およびそれに対する抗体を調製した。(3)in vitro感染実験:各種マウスのマクロファージや樹状細胞を菌体で刺激し,細胞内p65変化を免疫組織学的に検出し,細胞の接着性亢進との関連を評価した。(4)in vivo感染実験:各種マウスに生菌を感染させ,動員された細胞を取り出して調べた。感染局所からの得た細胞は,p65/L-piastinの細胞内分布が顕著に変動し,grancalcinがこれに顆粒状に分子集合する特徴的な所見が得られた。以上は,p65/L-plastinが感染防御において重要な役割を担うことを強く示唆している。
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