現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初、有用性が高いと期待していたクラミドモナス株からダイニンの精製が困難であったこと、精製法に不備がないことを確認したこと、代替のタグ付加アクチン遺伝子を作成した為、目標のダイニンの人工配列にまで、達成できませんでした。 最初に、鞭毛内腕ダイニンa,b,c,d,e,gの基部に共通して存在する軽鎖サブユニットで、タグを導入してインヴィトロ運動アッセイに使用できれば非常に有用性が高いと思われる”アクチン” のC末付近のループにHAタグを付加したクラミドモナス株を使用し、ダイニンの精製を行いました。しかしながら、鞭毛内のタグが付加されたダイニンの存在量が少なく、実験に十分な量のダイニンの精製ができませんでした。そこで、タグを付加する位置を最も影響が少ないと思われる、アクチンのC末端にタグを付加したアクチン遺伝子を作成しました。また、タグ付加アクチン遺伝子を導入するクラミドモナス株について、アクチン欠失変異株と内腕ダイニン精製を難しくする外腕ダイニンを除いた二重変異株を作成しました。 実験に使用できる状態でアクチンにタグを導入することが困難である場合に対処する為、ダイニンcのN末ドメインの抗体、ダイニンfの140K中間鎖に対する抗体が、微小管滑り運動の発生および運動性の観察を行うインヴィトロ運動アッセイを行う際にダイニンc、fそれぞれの基盤への固定に有用であることを確かめました。
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