| 研究実績の概要 |
ヒト正常膵管上皮細胞の他に、胆管上皮細胞、胆嚢上皮細胞、肺胞上皮細胞、胃粘膜上皮細胞、肝実質細胞を単離し安定培養後、HPV16 E6E7, MYC, RASの4遺伝子(EMR)をtetOffシステムを用いて導入することによりin vitroで活発に増殖し容易に培養可能な細胞株を得ることができた。またDoxycyclin(Dox)添加により遺伝子発現をシャットオフできることをWestern blotにより確認した。これらの細胞はDox添加により細胞増殖が遅くなり遺伝子導入前と同様の形態に戻った。これらの細胞をヌードマウス皮下に移植すると、胆管上皮細胞、胆嚢上皮細胞、肺胞上皮細胞、胃粘膜上皮細胞はEMRの発現に依存して1ヶ月以内に腫瘍を形成した。一方肝実質細胞についてはヌードマウス皮下、腎皮膜下とも移植を試みたが、今のところ腫瘍形成は観察されていない。腫瘍形成後のヌードマウスにDoxを投与するといずれの腫瘍も数日以内に退縮を開始した。できた腫瘍と退縮後の組織像をHE染色にて評価した。胆管上皮細胞、胆嚢上皮細胞、胃粘膜上皮細胞から形成した腫瘍はいずれも腺管構造を一部残し腺がんと診断できるものの病理学的には未分化腺がんと診断されるべきものであった。退縮後の組織にはいずれも単層円柱上皮からなる腺管構造を示し、胆管、胆のう、胃粘膜上皮とそれぞれの由来を思わせる構造や腺管内粘液貯留などを示した。肺胞上皮細胞由来の腫瘍は腺管構造をほとんど認めず、未分化腺がんの像を呈した。腫瘍退縮後の組織は単層円柱上皮からなる腺管構造が多数認められ、一部はClub細胞への分化を思わせる細胞も認められた。以上の結果より、ほぼ当初の計画通りコンディショナルにがん幹細胞と正常上皮細胞をDoxによりシャトルできる細胞を樹立し、ヌードマウス皮下で由来するヒトの臓器に類似する腺管構造を再現させることができた。
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