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2005 年度 研究成果報告書概要

ヒト精子の卵活性化因子PLCzetaの合成とその臨床応用に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 16591652
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 産婦人科学
研究機関山梨大学

研究代表者

星 和彦  山梨大学, 医学部附属病院, 教授 (20111289)

研究分担者 平田 修司  山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 助教授 (00228785)
笠井 剛  山梨大学, 医学部附属病院, 講師 (20194699)
正田 朋子  山梨大学, 大学院・医学工学総合研究部, 助手 (50345716)
研究期間 (年度) 2004 – 2005
キーワード精子 / 卵活性化 / PLC zeta / 男性不妊 / Ca oscillation / sperm factor / 受精 / リコンビナント
研究概要

近年、卵細胞質内精子注入法(ICSI)により卵細胞が活性化するという事実から、精子細胞質内にsperm factorが存在しており、2002年に初めて同定された精子に特異的に発現するphosholipase C(PLC)のアイソフォームであるPLC zeta(PLCz)は、そのcRNAやリコンビナントタンパクをマウス卵に注入するとCa^<2+> oscillationが誘起されることから、sperm factorの本態である可能性が極めて強いものと考えられている。ヒトPLCzは、EF handsドメイン、PLCcドメインならびにC2ドメインの3つのドメインから構成されるが、現在のところこのドメインとCa^<2+> oscillationを惹起する活性(oscillogen活性)との関連は未解明である。本研究では、第一に、真核細胞で活性を有するプロモーターを持つ発現ベクター(pcDNA III)に、ヒスチジンのタグならびにヒトPLCz cDNAの全長をタンデムで組み込み、第二に、構築した真核細胞発現ベクターを、ヒト子宮頸癌由来のHela細胞ならびにサル胎児腎由来の293T細胞にリポフェクチン法によってトランスフェクションした。この系でリコンビナントタンパクの合成を確認し、リコンビナントヒトPLCzの安定的発現の系を確立した。今後は、さらに、このリコンビナントPLCzのマイクロインジェクションによりマウス未受精卵にCa oscillationが惹起し得ることを確認している。今後は、精製したこのリコンビナントヒトPLCzをマウス卵細胞へマイクロインジェクションし、卵細胞内のCa oscillation活性を観察し、その生理活性を解析予定である。また、リコンビナントヒトPLCzの種々の変異体(欠失変異体や置換変異体)を作成し、PLCzの構造と生理活性との関連についての検討を行なう。最終的には、これらの成績を総合して、ヒト精子のPLCzの特性を明らかにすると同時に、リコンビナントヒトPLCzを臨床的に応用しようと考えている。

  • 研究成果

    (14件)

すべて 2005 2004

すべて 雑誌論文 (12件) 図書 (2件)

  • [雑誌論文] 当科における 1 day old ICSI の検討.2005

    • 著者名/発表者名
      笠井剛
    • 雑誌名

      日本受精着床学会雑誌 22(1)

      ページ: 158-162

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Chromatoid bodies : Aggresome-like characteristics and degradation sites for organelles of spermiogenic cells.2005

    • 著者名/発表者名
      Haraguchi CM
    • 雑誌名

      J Histochem Cytochem 53(4)

      ページ: 455-465

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] ヒト女性性ステロイドホルモン受容体の isoform および variant について.2005

    • 著者名/発表者名
      正田朋子
    • 雑誌名

      日本生殖内分泌学会雑誌 10

      ページ: 9-14

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Effect of repeated administration of clomiphene citrate at two different times on the endometrium in patients undergoing intrauterine insemination.2004

    • 著者名/発表者名
      Wada M
    • 雑誌名

      Reprod Med Biol 3(3)

      ページ: 153-157

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Life-table analysis of artificial insemination pregnancy rates for couples with male factor and idiopathic infertility.2004

    • 著者名/発表者名
      Suzuki K
    • 雑誌名

      Reprod Med Biol 3(1)

      ページ: 27-31

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Ubiquitin signals in the developing acrosome during spermatogenesis of rat testis2004

    • 著者名/発表者名
      Haraguchi CM
    • 雑誌名

      J Histochem Cytochem 52(11)

      ページ: 1393-1403

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Oocyte mitochondria : Strategy to improve embryogenesis2004

    • 著者名/発表者名
      Nagai S
    • 雑誌名

      Hum Cell 17(4)

      ページ: 195-201

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] 適応別にみた、人工授精施行回数の限界-Kaplan-Meier法を用いた検討-.2004

    • 著者名/発表者名
      鈴木孝太
    • 雑誌名

      産婦人科の実際 53(10)

      ページ: 1545-1549

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] 体外受精と顕微授精の適応基準と手技上のコツ.2004

    • 著者名/発表者名
      笠井剛
    • 雑誌名

      産婦人科治療 88(増)

      ページ: 631-639

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] 精子成熟機構.2004

    • 著者名/発表者名
      正田朋子
    • 雑誌名

      Hormone Frontier in Gynecology 11(3)

      ページ: 235-242

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [雑誌論文] Ubiquitin signals in the developing acrosome during spermatogenesis of rat testis : An Immunoelectron microscopic study.2004

    • 著者名/発表者名
      Haraguchi CM
    • 雑誌名

      J Histochem Cytochem 52(11)

      ページ: 1393-1403

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [雑誌論文] Oocyte mitochondria : Strategy to improve embryogenesis.2004

    • 著者名/発表者名
      Nagai S
    • 雑誌名

      Hum Cell 17(4)

      ページ: 195-201

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
  • [図書] 精子の形成と成熟.「生命の誕生にむけて-生殖補助医療胚培養士講習会テキスト-」2005

    • 著者名/発表者名
      正田朋子
    • 総ページ数
      87-94
    • 出版者
      近代出版
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [図書] 進化していく体外受精 progress、改訂第4版(鈴木秋悦編)2005

    • 著者名/発表者名
      正田朋子
    • 総ページ数
      260-263
    • 出版者
      Medical View
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より

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公開日: 2007-12-13  

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