| 研究課題/領域番号 |
16K08923
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| 研究機関 | 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究 |
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研究代表者 |
太田 宏之 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 生理学, 助教 (20535190)
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| 研究分担者 |
佐藤 泰司 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 薬理学, 准教授 (10505267)
丹生谷 正史 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 病院 精神科, 講師 (00228256)
野々山 恵章 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 小児科学, 教授 (40280961)
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| 研究期間 (年度) |
2016-10-21 – 2020-03-31
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| キーワード | デオキシアデノシン / アデノシンデアミナーゼ / 細胞毒性 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、デオキシアデノシン(dADO)の神経毒性を調査する。アデノシンデアミナーゼ(ADA)欠損症の研究から、dADOはADAの活性が低下した場合に増加し、白血球に対する毒性をもたらすことが知られている。しかし、ADA欠損症においては免疫系の異常だけではなく、脳神経系に対する障害も報告されており、dADOの神経細胞に対する作用が疑われる。そこで、本研究ではdADOの神経毒性について、培養系と脳急性スライスを用いて定量化する。
初年度は、繊維芽細胞の初代培養を用いてdADOの細胞毒性のアッセイ系を確立した。WST-8・MTT・LDHを用いて細胞毒性を評価する系を試行した。その結果、WST-8を用いたアッセイ系で再現性良く、細胞毒性を評価できることを確認した。この系を用いて、ADAの阻害剤であるデオキシコホルマイシン(dCF)存在下で、dADOに細胞毒性があることを確認した。dCFが無い場合は、dADOを添加しても細胞障害をWST-8によって確認することはできなかった。これは、内因性のADAがdADOの毒性を無効化していることを示している。
また、マウス大脳皮質-線条体の急性スライスを作成して、組織に対するdADOの神経毒性評価を試みた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
dADOの初代培養系に対する毒性のアッセイを確立した。その結果、内因性のADAを阻害した場合にのみ、dADOに繊維芽細胞に対する毒性があることを確認した。
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| 今後の研究の推進方策 |
マウス神経細胞の初代培養系とマウス大脳皮質-線条体の急性スライスを作成して、dADOの神経毒性評価を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
追加採択であったため計画通りの体制を組めず、現有の備品・試薬・消耗品で実施可能な線維芽細胞初代培養系を用いて実験を行ったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
急性スライスおよび神経細胞の初代培養系を用いたデオキシアデノシンの毒性アッセイを行う。
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