研究課題/領域番号 |
16K10006
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研究機関 | 国立研究開発法人国立成育医療研究センター |
研究代表者 |
安田 徹 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 成育遺伝研究部, 研究員 (50468576)
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研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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キーワード | ニーマンピック病C型 / ライソゾーム病 / プルキンエ神経細胞 / ミクログリア / マクロファージ |
研究実績の概要 |
ライソゾーム病の一つであるニーマンピック病C型(NPC)における神経変性のメカニズムを解明することを目的に研究を行っている。小脳プルキンエ神経細胞の脱落のメカニズムとして、ミクログリアおよび浸潤マクロファージが関与するという仮説を立て、その検証を行なっている。 まず始めにミクログリアを欠損するモデルマウスの作成を試みた。当初の計画に従い定位脳手術法により、マウス小脳および脳室内へ、クロドロン酸リポソームを投与したが、投与1日後、3日後においてミクログリアの死滅を確認することはできなかった。クロドロン酸リポソームの小脳内への拡散が不十分であった可能性が考えられる。また、CSF1R阻害剤Pexidartinib混合食餌によるミクログリアの死滅についても確認することはできなかった。これらの結果より、ミクログリアを欠損するCsf-1欠損opマウスとNPCモデルマウスとの交配による検証を計画し、現在マウスの繁殖を行なっている。少数ではあるがモデルマウスが産まれてきており、ロタロッドによる行動学的評価を開始している。 次に脳内浸潤マクロファージを欠損させる方法として、ジフテリア毒素受容体を単球・マクロファージに特異的に発現するマウス(CD11b-DTR)を用いる計画を立てた。ジフテリア毒素の投与経路、投与量、日数などについて検証を行い、最適の条件を決定した。現在このCD11b-DTRマウスとNPCモデルマウスとの交配を行っている段階である。 また脳内浸潤マクロファージにおけるトランスクリプトーム解析の準備を行っている。クサビラオレンジ(KuO)トランスジェニックマウス、NPCモデルマウス共に繁殖を行なっている。KuOトランスジェニックマウスよりCD115陽性の単球を分離し、NPCモデルマウスへの投与を行なったのちに小脳よりKuO陽性細胞を分離してトランスクリプトーム解析を行う予定である。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
当初の計画に従い、クロドロン酸リポソームのマウス脳内投与あるいはCSF1R阻害剤Pexidartinib混合食餌により、ミクログリアを欠損するモデルマウスの作成を試みた。 クロドロン酸リポソームについては、定位脳手術法により直接小脳へあるいは脳室内へ投与を行なったが、投与1日後、3日後において小脳内でのミクログリアの死滅を確認することはできなかった。クロドロン酸リポソームの小脳内への拡散が不十分であった可能性が考えられる。 またCSF1R阻害剤Pexidartinib混合食餌によるミクログリアの死滅についても確認することができなかった。参考文献の条件に従って処置を行なったが、食餌への混合量、脳内への到達量などに問題があった可能性が考えられる。 これらの問題を克服するため、新たにミクログリアを欠損するモデルマウスCsf-1欠損opマウスを用いることにした。現在NPCモデルマウスとの交配を行い、目的とするマウスが得られつつある。ロタロッドによる行動学的評価を開始している。
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今後の研究の推進方策 |
ミクログリアを欠損するモデルマウスCsf-1欠損opマウスを用いて、NPCモデルマウスにおける小脳プルキンエ神経細胞の脱落にミクログリアが関わる可能性を検証する。現在マウスの繁殖を行なっていて、少数ではあるがモデルマウスが産まれてきており、ロタロッドによる行動学的評価を開始している。 またジフテリア毒素受容体を単球・マクロファージに特異的に発現するCD11b-DTRマウスを用いて、NPCモデルマウスにおける小脳プルキンエ神経細胞の脱落に脳内浸潤マクロファージが関わる可能性を検証する。ジフテリア毒素の投与経路、投与量、日数などについて検証を行い、最適の条件を決定した。現在このCD11b-DTRマウスとNPCモデルマウスとの交配を行っている段階である。 さらに脳内浸潤マクロファージをセルソーターにより分離し、トランスクリプトーム解析を行う予定である。現在用いるモデルマウスの繁殖を行なっている。
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次年度使用額が生じた理由 |
当初の計画では当該年度中に脳内浸潤マクロファージのトランスクリプトーム解析を行う予定であったが、マウスの繁殖に時間がかかってしまったため、次年度に行う予定である。
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次年度使用額の使用計画 |
KuOトランスジェニックマウスよりCD115陽性の単球を分離し、NPCモデルマウスへの投与を行なったのちに小脳よりKuO陽性の脳内浸潤マクロファージをセルソーターにより分離し、トランスクリプトーム解析を行う。
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