| 研究課題/領域番号 |
16K11349
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
猪股 裕紀洋 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (50193628)
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| 研究分担者 |
磯野 香織 熊本大学, 医学部附属病院, 助教 (10756258)
本田 正樹 熊本大学, 医学部附属病院, 非常勤診療医師 (80573609)
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| 研究期間 (年度) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| キーワード | 細胆管反応 / SOX9遺伝子 / SOX9ノックアウトマウス / 胆道閉鎖症 |
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| 研究実績の概要 |
細胆管反応は、肝臓の自己複製能力が障害を受けると誘導される現象で、肝疾患の病態進行を考える上で重要な現象であるが、そのメカニズムは明確にはなっていない。肝修復が目的であるとする報告がある一方で、肝線維化の成因とも言われており、肝臓の病態に関わる重要な現象の一つである。我々のこれまでの胆道閉鎖症の肝臓を用いた臨床的研究により、SOX9は細胆管反応に寄与している重要因子の一つであると考えている。平成28年度は、細胆管反応のメカニズムのさらなる解明をめざすため、SOX9ノックアウトマウスを用いた肝障害実験を行った。SOX9ノックアウトマウスは、Cre/loxPシステムを利用して作製した。SOX9ノックアウトマウスと野生型マウスとを用いて肝障害モデルを作製し、肝障害は、四塩化炭素、DDC(3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydrocollidine)、総胆管結紮により誘導した。それぞれの肝障害方法と解析日は、四塩化炭素は、500μl/kg, 週3回腹腔内投与により肝障害を加えて、3週・6週・10週目に解析を行った。DDCは、0.1%の濃度となるように餌に混ぜて経口摂取させ、1週目・3週目・3週間肝障害を加えた後2週間休薬、の時点で解析を行った。総胆管結紮では、麻酔下に小開腹を行い総胆管を結紮し、1週目・2週目で解析を行った。血液検査の結果は、四塩化炭素において、SOX9KOマウスの肝酵素が有意に増悪していた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
年度当初、平成28年4月中旬の熊本地震による、動物飼育、総合研究棟の建屋、および実験室内研究器具の被害により、本研究に関わる動物実験や組織学的な検討などの実験本体ができない期間が半年程度に及び、さらに、医局に附帯していた実験室も、平成28年末からの臨床研究棟の新築移転に伴う新実験室整備に時間を要したため使用開始が遅れ、予定していた実験を行うハード面での体制が取れなかった。
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| 今後の研究の推進方策 |
当初の予定通り、細胆管反応の成因にSOX9がどの様に関与しているか調べるため、SOX9KOマウスと野生型マウスの肝障害モデルを用いた比較解析を行っていく。評価方法として、当初蛍光抗体法により染色した組織切片での評価を予定していたが、その後の評価のしやすさも考慮し酵素抗体法により染色した切片を用いた評価と、今回の検討で得られたマウス肝生標本を用いてリアルタイムPCRを行い、遺伝子発現量の推移を調べる。また、計画書どおりに、SOX9陽性肝細胞とTROP2陽性細胞との関連、胆道閉鎖症以外の肝疾患でみられる細胆管反応について解析していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
平成28年4月の熊本地震により、当初研究実施が困難であった。また、その後の研究棟移転のため、その準備を含めた期間も研究実施が困難であったため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
平成28年度研究実施予定で、研究ができなかった計画については、平成29年度に速やかに実施していく。また、得られた結果を元に、平成29年度以降の予定研究計画を進めていく。
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